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        • 亞鐵離子含量檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        亞鐵離子含量檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        中文名稱
        亞鐵離子含量檢測試劑盒 微量法
        儲存條件
        2-8℃
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Ferrous Ion Content Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S
        自備試劑
        該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5415
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途亞鐵離子含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        亞鐵離子含量檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號:BC5415

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體125mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體13 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 標(biāo)準(zhǔn)10mg FeSO4·7H2O,臨用前加入900μL蒸餾水20μL濃硫酸,充分混勻,配制成40 mmol/L標(biāo)準(zhǔn)液,2-8℃可保存2周。

        產(chǎn)品說明:

        鐵是人體必需的微量元素之一,對于維持機體正常生理功能具有重要作用。亞鐵離子是血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素及其他酶系統(tǒng)的重要組成成分,幫助氧的運輸,促進(jìn)脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紊亂,并影響機體的免疫功能。鐵過量是引發(fā)或加劇多種慢性?。ㄈ缣悄虿?、心腦血管疾病、神經(jīng)退化性疾病等)的危險因素。Fe2+酸性條件下與三吡啶基三嗪形成藍(lán)色配合物,在593nm處有吸收峰,通過測定該波長吸光度即可計算Fe2+的含量。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、可調(diào)式移液槍、冰、蒸餾水濃硫酸

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。10000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        2. 細(xì)菌/細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率200W,超聲3秒,間隔7秒,總時間5min);然后10000g4℃離心10min,取上清置于冰上待測。

        3. 血清(漿)等液體樣本:直接測定。若有渾濁請離心后取上清待測。

        二、測定步驟

        1. 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至593nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

         

        2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:10μL 40 mmol/L標(biāo)準(zhǔn)液,加入990μL蒸餾水,混勻得到400 μmol/L標(biāo)準(zhǔn)液400 μmol/L標(biāo)準(zhǔn)液試劑一進(jìn)行稀釋得到50、2512.56.25、3.125、1.56250.78125μmol/L標(biāo)準(zhǔn)液,現(xiàn)配現(xiàn)用。

        3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋可參考下表:

        序號

        稀釋前濃度(μmol/L

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        試劑一體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/L

        1

        400

        125

        875

        50

        2

        50

        500

        500

        25

        3

        25

        500

        500

        12.5

        4

        12.5

        500

        500

        6.25

        5

        6.25

        500

        500

        3.125

        6

        3.125

        500

        500

        1.5625

        7

        1.5625

        500

        500

        0.78125

        備注:實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需200µL標(biāo)準(zhǔn)液。

        4. 1.5mL離心管按下表步驟加樣:

        試劑名稱(µL

        測定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        200

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)液

        -

        200

        -

        試劑一

        -

        -

        200

        試劑二

        100

        100

        100

        充分混勻,37℃靜置10min

        氯仿

        100

        -

        -

        充分渦旋震蕩5min,之后12000g常溫離心10min,小心吸取上層無機相200μL微量玻璃比色皿/96孔板,測定593nm處吸光值,記為A測定,計算ΔA測定=A測定-A空白。

        593nm處吸光值,記為A標(biāo)準(zhǔn)、A空白,計算ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)-A空白??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)曲線只需測1-2次。

        三、亞鐵離子含量計算

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,μmol/L)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(yΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA測定(y,ΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(x,μmol/L。

        2. 亞鐵離子含量的計算:

        1)按血清(漿)等液體體積計算:亞鐵離子含量(μmol/L=x

        2)按樣本蛋白濃度計算:亞鐵離子含量(μmol/mg prot=x×10-3×V提取÷Cpr×V提?。?/span>=0.001x÷Cpr

        3)按樣本質(zhì)量計算:亞鐵離子含量(μmol/g 質(zhì)量)=x×10-3×V提取÷W=0.001x÷W

        4)按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計算:亞鐵離子含量(μmol/106 cell)=x×10-3×V提取÷N= 0.001x÷N

        Cpr蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;V提?。杭尤?/span>試劑一的體積,1mLW:樣本質(zhì)量,gN細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),以106計;10-3:單位換算系數(shù),1μmol/L=10-3μmol/mL。

        注意事項:

        1. 用試劑一稀釋得到的標(biāo)準(zhǔn)液容易失效,建議現(xiàn)用現(xiàn)配。

        2. 如果?A測定過低或測定管吸光值接近空白管,可以增加樣本量后再進(jìn)行測定;如果?A測定大于0.4,建議將樣本用試劑一適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式。

        3. 由于氯仿會腐蝕96孔板,所以在吸取上層無機相時需要注意不要吸到下層氯仿層。

        實驗實例:

        1、 0.1055g 小鼠肝臟組織,加入1mL試劑一,冰浴勻漿,離心后取上清按照測定步驟操作,使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.272-0.050=0.222,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0076x-0.0013,R2=0.9993,計算x=29.38μmol/L,按樣本質(zhì)量計算 

        亞鐵離子含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.001x÷W =0.278 μmol/g 質(zhì)量。

        2、 200μL血清,按照測定步驟操作,使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.301-0.050=0.251,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0076x-0.0013,計算x=33.20μmol/L,按液體體積計算

        亞鐵離子含量(μmol/L=x=33.20 μmol/L。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Dong C, Yang M, Wang W. Study on spectrophotometric determination of Fe(Ⅱ) and Fe(Ⅲ) with 2, 4, 6- tri(2′-pyridyl)-1, 3, 5-triazine. [J]. Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2004, (01):76-78.

        [2] Huang Y, Ma H, Xu J, et al. Development and Validation of Reference Methods for Determination of Serum iron. [J]. Chinese Journal of Laboratory Diagnosis, 2011, 15(03):453-457.

        [3] Wang H, Liu B, Ding Z, et al. Ferene method flow injection analysis as optimized in situ analysis of dissolved iron in marine waters. [J]. Marine Sciences, 2016, 40(05):82-87.

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