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        • 半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-19
        半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Cysteinyl Sulfoxide Lyase (CSL)Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5395
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)活性檢測(cè)試劑盒說明書

        微量法

        貨號(hào):BC5395

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體1.5 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體3 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體3 mL×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體12 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:試劑放于試劑瓶?jī)?nèi)EP管中。臨用前加入4 mL蒸餾水溶解,-20分裝可保存4周,避免反復(fù)凍融。

        2、 試劑二工作液:臨用前根據(jù)樣本量將試劑二用蒸餾水稀釋5000倍,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        1、 標(biāo)準(zhǔn)品:20μmol/mL *酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液。

        2、 0.625μmol/mL*酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液的配制:臨用前取30μL20μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液EP管中,加入930μL蒸餾水充分溶解,配制成0.625μmol/mL*酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液備用。

        產(chǎn)品說明:

        半胱氨酰亞砜裂解酶,簡(jiǎn)稱蒜酶,又名蒜氨酸酶。半胱氨酰亞砜裂解酶幾乎存在于所有蔥屬植物中,如大蒜,洋蔥,韭菜等。蒜氨酸酶存在于液泡內(nèi),其天然底物蒜氨酸存在于細(xì)胞質(zhì)中;蒜氨酸酶與蒜氨酸接觸并催化產(chǎn)生蒜素和順、反式阿霍烯并生成*酸和氨等副產(chǎn)物,也是大蒜等植物辛辣氣味的主要來源。

        半胱酰胺亞砜裂解酶可以催化S-甲基-L-半胱*酸亞砜生成*酸。*酸可與2,4-二硝 * 肼反應(yīng)生成2,4-二硝*腙,在堿性條件下顯棕紅色;測(cè)定505nm吸光度的變化,即可計(jì)算CSL酶活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、蒸餾水和冰。

        操作步驟:

         

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,4℃浸提30分鐘。12000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

        2. 液體樣本:直接測(cè)定。(若溶液呈現(xiàn)渾濁,則離心取上清后再測(cè)定)。

        二、測(cè)定步驟

        1、 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505nm,可見分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

        2、操作表:(在1.5mLEP管或者96孔板中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測(cè)定管

        對(duì)照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        標(biāo)準(zhǔn)空白管

        樣本

        20

        20

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        20

        -

        試劑一

        20

        -

        -

        -

        試劑二工作液

        20

        20

        20

        20

        蒸餾水

        -

        20

        20

        40

        混勻后,37℃反應(yīng)30min

        試劑三

        20

        20

        20

        20

        試劑四

        20

        20

        20

        20

        混勻后,37℃反應(yīng)30min

        試劑五

        100

        100

        100

        100

        混勻,室溫放置10min,在505nm波長(zhǎng)處測(cè)各管吸光度。記作A測(cè)定,A對(duì)照,A標(biāo)準(zhǔn),A標(biāo)準(zhǔn)空白。?A測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白。(標(biāo)準(zhǔn)管和標(biāo)準(zhǔn)空白管只需做1-2次。)

        三、CSL活性計(jì)算

        (1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

        單位的定義:37℃,每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol *酸定義為一個(gè)酶活力單位。

        CSL活性(U/mg prot=?A測(cè)定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)×V÷V×Cpr÷T×F=0.0208×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr ×F

        (2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        單位的定義:37℃,每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol *酸定義為一個(gè)酶活力單位。

        CSL活性(U/g 質(zhì)量)=?A測(cè)定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)×V÷V÷V樣總×W÷T×F=0.0208×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F

        (3) 按血清(漿)等液體體積計(jì)算

        單位的定義:每mL血清(漿)等液體每分鐘催化產(chǎn)生1μmol *酸定義為一個(gè)酶活力單位。

        CSL活性(U/mL=?A測(cè)定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)×V÷V÷T×F=0.0208×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F

        C標(biāo)準(zhǔn)*酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液的濃度,0.625μmol/mL;V:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.02mLV樣總:加入的提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30minCpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;F:樣本稀釋倍數(shù)。

        注意事項(xiàng):

        1. 如果測(cè)定結(jié)果?A測(cè)定1,可以對(duì)樣本用蒸餾水進(jìn)行稀釋或者縮短第一步反應(yīng)時(shí)間;吸光值較小,可以加大樣本量或者延長(zhǎng)第一步反應(yīng)時(shí)間至1h或者更長(zhǎng)時(shí)間。注意計(jì)算時(shí)同步修改計(jì)算公式。

        2. 對(duì)于初次測(cè)定樣本,建議將樣本勻漿液用蒸餾水進(jìn)行梯度稀釋后測(cè)定,選取最佳的稀釋倍數(shù)。洋蔥、香菇、大蒜類樣本建議直接稀釋4-10倍后再進(jìn)行最佳稀釋倍數(shù)摸索。(實(shí)驗(yàn)室洋蔥進(jìn)行了8倍稀釋,蒜進(jìn)行了64倍稀釋)

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 稱取0.1233g蒜樣本,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿,上清用蒸餾水稀釋64倍,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算?A測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.46-0.113=0.347,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.551-0.064=0.487,帶入公式計(jì)算:

        CSL活性(U/g 質(zhì)量)= 0.0208×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=7.693 U/g 質(zhì)量。

        2、 稱取0.1263g洋蔥樣本,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿,上清稀釋4倍,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算?A測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.477-0.382=0.095,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.551-0.056=0.487,帶入公式計(jì)算:

        CSL活性(U/g 質(zhì)量)= 0.0208×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=0.169 U/g 質(zhì)量。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Su Qianqian, Tang Jing, Zhao Liyan, et al. Effects of nanocomposite packaging on the quality and formaldehyde content of shiitake mushrooms during storage [J]. Food Science, 2015(8):6.

        [2] Kumagai H, ?Hidetoshi KONO, Sakurai H, et al. Comparison of C-S Lyase in Lentinus edodes and Allium sativum [J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2022(66): 2560–2566.

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