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        您的位置: 網(wǎng)站首頁 > 產(chǎn)品中心 > 生化檢測試劑盒-常量法 > 氮代謝系列 > BC5330-50T/48S低密度脂蛋白膽*醇含量檢測試劑盒 氮代謝
        • 低密度脂蛋白膽*醇含量檢測試劑盒 氮代謝
        產(chǎn)品名稱:

        低密度脂蛋白膽*醇含量檢測試劑盒 氮代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        低密度脂蛋白膽*醇含量檢測試劑盒 氮代謝
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Low-Density Lipoprotein Cholesterol(LDL-C)Content Assay kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S
        自備試劑
        該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5330
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途低密度脂蛋白膽*醇含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        低密度脂蛋白膽*醇(LDL-C)含量檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC5330

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        自備試劑

        -

        試劑一A

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一B

        液體500 μL×1

        2-8℃保存

        試劑一C

        液體75 μL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體20 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        提取液一:自備異丙醇,大約需要60mL,常溫保存;試劑盒內(nèi)提供一個30mL棕色空瓶,僅做分裝使用,請自行標(biāo)注試劑名稱。

        試劑一C:液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。

        試劑一的配制:根據(jù)樣本量將試劑一A:試劑一B:試劑一C2.25 mL20 μL3 μL2.273mL,約3T)的比例進行配制,現(xiàn)用現(xiàn)配,當(dāng)天用完。

        標(biāo)準品:10 mg膽*醇,臨用前加入517 μL提取液,振蕩溶解,即為50 μmol/mL的膽*醇標(biāo)準溶液,2-8℃可保存4周。

        產(chǎn)品說明:

        低密度脂蛋白是血清脂蛋白中膽*醇含量最高的一種脂蛋白,其顆粒較小,主要作用是將肝臟組織的膽*醇經(jīng)過血液轉(zhuǎn)運至其他組織,促進組織細胞中膽*醇的積累。眾多流行病學(xué)研究表明,血清低密度脂蛋白膽*醇(Low-Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)水平與動脈粥樣硬化(AS)、冠心?。?/span>GHD)呈正相關(guān),對于臨床診斷動脈粥硬化、冠心病、高血壓等疾病有重要參考價值。

        使用選擇性表面活性劑,特異性解離出CM、VLDL、HDL中的膽*醇,而不作用于LDL,解離出的膽*醇與膽*醇酯酶(CHER)和膽*醇氧化酶(CHOD)反應(yīng)產(chǎn)生H2O2,在缺乏顯色劑的情況下被消耗掉而不顯色;未被分解的LDL在另一特異性表面活性劑的作用下解離,利用酯酶催化膽*醇酯水解生成游離膽*醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽*醇酯轉(zhuǎn)化為FC;進一步利用膽*醇氧化酶催化FC氧化,生成4-膽甾烯酮和H2O2;最后利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安*林和苯胺類似物,生成紫色化合物,其在546nm有特征吸收峰。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者

         

        增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、可調(diào)式移液槍、冰、蒸餾水、異丙醇(AR。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿。10000g,4℃離心10min,取上清置于冰上待測。

        2. 細菌/細胞:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300W,超聲2秒,間隔3秒,總時間3min);然后10000g4℃離心10min,取上清置于冰上待測。

        3. 血清(漿)等液體樣本:直接測定。若有沉淀請離心后取上清待測。

        二、測定步驟

        1. 可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至546nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 根據(jù)樣本量取試劑一、試劑二37℃預(yù)熱10min。

        3. 標(biāo)準溶液的稀釋:50μmol/mL膽*醇標(biāo)準溶液用提取液進行稀釋得到2.5、1.25、0.6250.3125、0.15625、0.078125、0.0390625μmol/mL標(biāo)準溶液備用。

        4. 標(biāo)準溶液稀釋可參考下表:(實驗中每個標(biāo)準管需20µL標(biāo)準溶液

        序號

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標(biāo)準溶液體積(µL

        提取液體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        50

        50

        950

        2.5

        2

        2.5

        200

        200

        1.25

        3

        1.25

        200

        200

        0.625

        4

        0.625

        200

        200

        0.3125

        5

        0.3125

        200

        200

        0.15625

        6

        0.15625

        200

        200

        0.078125

        7

        0.078125

        200

        200

        0.0390625

        5. 1mL玻璃比色皿按下表步驟加樣:

        試劑名稱(µL

        測定管

        標(biāo)準管

        空白管

        樣本

        20

        -

        -

        標(biāo)準液

        -

        20

        -

        提取液

        -

        -

        20

        試劑一

        750

        750

        750

        充分混勻,37℃靜置5min,測定546nm處吸光值A1,分別記為A1測定、A1標(biāo)準、A1空白。

        試劑二

        250

        250

        250

        充分混勻,37℃靜置5min,測定546nm處吸光值A2,分別記為A2測定、A2標(biāo)準、A2空白,計算?A測定=A2測定-A1測定)-A2空白-A1空白),?A標(biāo)準=A2標(biāo)準-A1標(biāo)準)-A2空白-A1空白)??瞻坠芎蜆?biāo)準曲線只需測1-2次。

        注:若樣本為血清(漿)等液體樣本,則需要增加血清(漿)空白管’-即將空白管中的提取液(異丙醇)更換為蒸餾水進行實驗,計算ΔA測定=A測定-A血清(漿)空白,標(biāo)準管測定及ΔA標(biāo)準計算不變。

        三、低密度脂蛋白膽*醇含量計算

        1. 標(biāo)準曲線的繪制:

        根據(jù)標(biāo)準管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(y,ΔA標(biāo)準),建立標(biāo)準曲線。根據(jù)標(biāo)準曲線,將ΔA測定(yΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(x,μmol/mL)。

        2. LDL-C含量的計算:

        1)按血清(漿)等液體體積計算:

        LDL-C含量(μmol/dL=x×100

        2)按樣本蛋白濃度計算:

        LDL-C含量(μmol/mg prot=x×V樣本÷Cpr×V樣本)=x÷Cpr

        3)按樣本質(zhì)量計算:

        LDL-C含量(μmol/g 質(zhì)量)=x×V樣本÷W×V樣本÷V提取)=x÷W

        4)按細胞/細菌數(shù)量計算:

        LDL-C含量(μmol /104 cell)=x×V樣本÷N×V樣本÷V提?。?/span>= x÷N

        100單位換算系數(shù),1dL=100mL;V樣本:加入樣本上清的體積,0.02mL;V提?。杭尤胩崛∫旱捏w積,1mL;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;N:細菌或細胞總數(shù),以萬計。

        注意事項:

        1. 如果測定吸光值超出線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者用提取液稀釋樣本上清(液體樣本用蒸餾水稀釋)后再進行測定。注意同步修改計算公式。

        2. 提取液中含有使蛋白變性的成分,故按蛋白濃度計算時需要重新提取蛋白進行測定。

        實驗實例:

        1、 20μL人血清樣本,按照測定步驟操作,使用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A2測定-A1測定)-A2空白-A1空白)=0.728-0.028-0.014-0.013=0.699,根據(jù)標(biāo)準曲線y=0.1723x-0.0178,計算x=4.160,按血清(漿)等液體體積計算

        LDL-C含量(μmol/dL=x×100=4.160×100=416.019 μmol/dL

        2、 0.11g小鼠肝臟樣本,加入1mL提取液,冰浴勻漿,離心后取上清按照測定步驟操作,使用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A2測定-A1測定)-A2空白-A1空白)=0.264-0.028-0.014-0.013=0.235,根據(jù)標(biāo)準曲線y=0.1723x-0.0178,計算x=1.467,按樣本質(zhì)量計算

        LDL-C含量(μmol/g 質(zhì)量)=x÷W=1.467÷0.11=13.338 μmol/g 質(zhì)量。

        參考文獻:

        [1] Hiroyuki S, Tetsumi I, Yoshinori U, et al. Homogeneous assay for measuring low-density lipoprotein cholesterol in serum with triblock copolymer and α-cyclodextrin sulfate[J]. Clinical Chemistry, 1998, 44(3):522-531.

        [2] Sakaue T, Hirano T, Yoshino G, et al. Reactions of direct LDL-cholesterol assays with pure LDL fraction and IDL: comparison of three homogeneous methods [J]. Clinica Chimica Acta, 2000, 295(1-2):97-106.

         

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0590/BC0595  游離脂肪酸(FFA)含量檢測試劑盒

        BC0750/BC0755  乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測試劑盒

        BC1890/BC1895  游離膽*醇(FC)含量檢測試劑盒

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        低密度脂蛋白膽*醇含量檢測試劑盒 氮代謝 低密度脂蛋白膽*醇含量檢測試劑盒 氮代謝

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