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        • 植酸酶活性檢測試劑盒 微量法
        產品名稱:

        植酸酶活性檢測試劑盒 微量法

        產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-19
        植酸酶活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Phytase Activity Assay Kit
        別名
        植酸酶試劑盒 植酸酶測試盒
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S
        自備試劑
        該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網站說明書

        產品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC3145
        規(guī)格100T/48S供貨周期現貨
        主要用途植酸酶活性檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合

        植酸酶活性檢測試劑盒

        微量法

        貨號:BC3145

        規(guī)格:100T/48S

        產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60mL×1

        2-8℃保存

        緩沖液

        液體15mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8℃保存

        標準

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:臨用前加入到緩沖液中(可吸取緩沖液到試劑一瓶中反復沖洗),充分震蕩溶解,用不完的試劑2-8℃可保存4周。

        2. 試劑二:臨用前加入3.15mL蒸餾水充分溶解,再將槍頭伸入液面下緩慢加入0.85mL濃硫酸,2-8℃可保存4周。

        3. 試劑三:臨用前加入20mL蒸餾水充分溶解,2-8℃可保存4周。。

        4. 工作液:臨用前根據測定數量將試劑二:試劑三=1mL5mL (40T)的比例混勻,配制后于2-8℃可保存3天。

        5. 標準品:5μmol/mL無機磷標準液。

        產品說明:

        植酸酶(Phytase)又叫肌醇六磷酸酶,是一種蛋白質和糖的結合酶,植酸酶可以分解植酸產生無機磷和肌醇,極大的提高生物對養(yǎng)分的利用率,天然植酸酶廣泛存在于植物、動物組織和微生物中,現多用微生物來合成植酸酶進行生產應用,植酸酶在糧食生產、畜牧養(yǎng)殖領域具有廣泛的研究價值。

        在一定的環(huán)境條件下,植酸酶可以分解植酸鈉(肌醇六磷酸十二鈉)產生無機磷和肌醇衍生物,在酸性條件下,無機磷和鉬酸銨顯色劑發(fā)生反應,產生藍色的鉬藍物質,其在700nm有特征吸收峰,通過測定無機磷的含量,可計算出植酸酶的活性。 

         

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

         

        可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調式移液器、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、濃硫酸、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 組織:按照樣本質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿;4000g 4℃離心10min(若仍然渾濁,可延長離心時間),取上清置冰上待測。

        2. 細菌或細胞樣本:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細菌或細胞加入 1mL 提取液)加入提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率200W,超聲 3s,間隔 7s,總時間3min),4000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        3. 培養(yǎng)液或其他液體:直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。

        二、測定步驟

        1、可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至700nm,可見分光光度計用蒸餾水調零。

        2、標準溶液的稀釋:將5μmol/mL無機磷標準液用蒸餾水稀釋至53、1、0.5、0.250.1250.0625、0.03125μmol/mL備用。

        3、標準溶液稀釋可參考下表

        序號

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標準液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        5

        150

        100

        3

        2

        5

        50

        200

        1

        5

        1

        200

        200

        0.5

        6

        0.5

        200

        200

        0.25

        7

        0.25

        200

        200

        0.125

        8

        0.125

        200

        200

        0.0625

        9

        0.0625

        200

        200

        0.03125

        備注:實驗中每個標準管需50µL標準溶液。

        4、在EP管中按下表步驟加樣:

        試劑名稱(μL)

        測定管

        對照管

        標準管

        空白管

        樣本

        50

        50

        -

        -

        標準溶液

        -

        -

        50

        -

        37℃水浴5min

        -

        -

        試劑一

        120

        -

        -

        -

        37℃水浴30min,沸水浴10min

        -

        -

        試劑一

        -

        120

        -

        -

        蒸餾水

        -

        -

        120

        170

        工作液

        150

        150

        150

        150

             溫靜置10min,8000g,室溫離心10min,吸取200μL上清,于700nm處測定吸光值,分別記為A測定、A對照、A標準A空白。分別計算 ΔA=A測定-A對照,ΔA標準=A標準-A空白(標準曲線和空白管只需做 1-2 次,每個測定管需設置一個對照管)。

        二、植酸酶活性的計算

        1. 標準曲線的繪制

        根據標準管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標準(yΔA標準),建立標準曲線。根據標準曲線,將ΔAy,ΔA)代入公式計算樣本濃度(xμmol/mL)。

        2. 植酸酶活性計算

        1)按樣本蛋白質濃度計算

        單位定義:在37,pH5.5環(huán)境下,mg組織蛋白每分鐘在反應體系釋放1μmol無機磷為1個酶活力單位。

        植酸酶活性(U/mg prot= x×V樣總÷Cpr×V樣總÷T= x÷Cpr÷30

        2)按樣本質量計算

        單位定義:在37,pH5.5環(huán)境下,g組織每分鐘在反應體系釋放1μmol無機磷為1個酶活力單位。

        植酸酶活性(U/g 質量)= x×V樣總÷W÷T=x÷W÷30;

        3)按細菌/細胞數量計算

        單位定義:在37,pH5.5環(huán)境下,104個細胞每分鐘在反應體系釋放1μmol無機磷為1個酶活力單位。

        植酸酶活性(U/104cell=  x×V樣總÷N÷T= x÷N÷30;

        4)按照液體樣本體積計算

        單位定義:在37pH5.5環(huán)境下,mL樣本每分鐘在反應體系釋放1μmol無機磷為1個酶活力單位。

        植酸酶活性(U/mL= x×V÷V÷T= x÷30;

        V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min;N細胞數量以萬計。

        注意事項:

        1. 為防止沸水浴10min過程中水分散失,建議使用螺旋管或用封口膜給EP管纏口。

        2. 如果測定吸光值過低或接近空白,適當延長反應時間或加大樣本量后,重新測定。如果A測定大于1.5或者ΔA超過檢測范圍,建議將樣本用蒸餾水進行適當稀釋后進行測定。注意同步修改計算公式。

        3. 結果于40min內測定完畢。

        實驗實例:

        0.15g菠菜種子(已發(fā)芽),按照測定步驟操作,測得計算A測定 = 0.692,A對照 = 0.573,?A= 0.119,將?A代入標曲公式y = 0.2991x + 0.0121,得出x= 0.357,按樣本質量計算酶活得:

        植酸酶活性(U/g 質量)= 0.0794 U/g 質量。

        參考文獻:

        [1] Senna R , Simonin V , Silva-Neto M A C , et al. Induction of acid phosphatase activity during germination of maize (Zea mays) seeds.[J]. Plant Physiology & Biochemistry, 2006, 44(7-9):467-473.

        [2] Iqbal T H , Lewis K O , Cooper B T . Phytase activity in the human and rat small intestine[J]. Gut, 1994, 35(9):1233-1236.

        [3] Azeke M A ,  Egielewa S J ,  Ihimire E . Effect of germination on the phytase activity, phytate and total phosphorus contents of rice (Oryza sativa), maize (Zea mays), millet (Panicum miliaceum), sorghum (Sorghum bicolor) and wheat (Triticum aestivum)[J]. Journal of Food Science&Technology, 2011.

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        植酸酶活性檢測試劑盒 微量法 植酸酶活性檢測試劑盒 微量法

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