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        • 丙酮酸含量檢測試劑盒 三羧酸
        產(chǎn)品名稱:

        丙酮酸含量檢測試劑盒 三羧酸

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        丙酮酸含量檢測試劑盒 三羧酸
        儲存條件
        -20℃
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Pyruvate (PA) Content Assay Kit(Enzymatic Method)
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5260
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途丙酮酸含量檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        丙酮酸(PA含量檢測試劑盒(酶法)說明書

        可見分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC5260

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體30mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體60mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑三

        液體37μL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體8 mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入3.6mL蒸餾水充分溶解,分裝保存,-20℃可以保存4周,避免反復凍融;

        2、 試劑三:臨用前按試劑三:蒸餾水=10μL1mL(約13T)的比例進行稀釋,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        3、 標準品:20 μmol/mL丙酮酸鈉標準液。

        產(chǎn)品說明:

        丙酮酸通過乙酰 CoA 連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝,起著重要的樞紐作用。

        pH = 7.5 時,丙酮酸在LDH的催化作用下與NADH反應,生成NAD + 和乳酸。在1-mPMS作用下,WST-1可與NADH反應,產(chǎn)生水溶性formazan。通過檢測450nm條件下吸光值,可以計算出丙酮酸含量。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(106個):提取液體積(mL)為5~101的比例(建議5百萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200w,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰 上待測。

         

         

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        2. 血清(漿)等其他液體:直接檢測。若有沉淀請離心后取上清待測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到450nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 試劑一37℃預熱20min以上。

        3、 標準品的制備:將20μmol/mL丙酮酸鈉標準液用蒸餾水稀釋得到0.5、0.25、0.125、0.06250.03125μmol/mL標準溶液備用。

        4、 標準品稀釋表:

        序號

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標準液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        20

        50

        950

        1

        2

        1

        500

        500

        0.5

        3

        0.5

        500

        500

        0.25

        4

        0.25

        500

        500

        0.125

        5

        0.125

        500

        500

        0.0625

        6

        0.0625

        500

        500

        0.03125

        實驗中每個標準管需100µL標準溶液。

        5、 操作表:(1.5mL EP管中加入下列試劑)

        試劑名稱(µL

        測定管

        對照管

        標準管

        空白管

        上清液

        100

        100

        -

        -

        標準品

        -

        -

        100

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        100

        試劑一

        775

        900

        775

        775

        試劑二

        50

        -

        50

        50

        試劑三

        75

        -

        75

        75

        混勻后37℃避光反應30min

        試劑四

        100

        100

        100

        100

        混勻后37℃避光反應30min吸取1000μL1mL玻璃比色皿,測定450nm下的吸光度,計算ΔA測定= A空白-(A測定-A對照)ΔA標準=A空白-A標準。(標準曲線和空白管只需測1-2次即可)

        三、丙酮酸含量計算

        1、標準曲線繪制:

        根據(jù)標準管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標準y,ΔA標準),建立標準曲線。根據(jù)標準曲線,ΔA測定代入方程得到xμmol/mL。

        2、含量計算:

        (1) 按液體樣本的體積計算

        丙酮酸含量(μmol/mL=x×V÷V= x

         

        (2) 按組織質(zhì)量計算

        丙酮酸含量(μmol/g 質(zhì)量)= x×V÷(V÷V×W) = x÷W

        (3) 按蛋白濃度計算

        丙酮酸含量(μmol/mg prot= x×V÷Cpr×V樣)= x÷Cpr

        (4) 按細菌/細胞數(shù)量計算

        丙酮酸含量(μmol/106 cell= x ×V÷V÷V×N= x÷N

        V樣:加入的樣本體積,0.1mL;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL;V提:加入提取液的體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g;N:細菌或細胞數(shù)量,以百萬計。

        注意事項:

        1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者用蒸餾水稀釋樣本后再進行測定。

        實驗實例:

        1、 稱取約0.1g鼠肺,加入1mL提取液,冰浴研磨,8000g,4℃離心10min,取上清待測。之后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定= A空白-A測定-A對照=1.122-0.678-0.299=0.743,標曲y=1.4748x+0.0548,x=0.467µmol/mL, 計算丙酮酸含量得:

        丙酮酸含量(µmol/g 質(zhì)量)= x×V÷(V÷V×W) = x÷W =4.667µmol/g 質(zhì)量。

        2、 稱取約0.1g鳶尾,加入1mL提取液,冰浴研磨,8000g4℃離心10min,取上清待測。之后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定= A空白-A測定-A對照=1.122-0.572-0.203=0.753,標曲y=1.4748x+0.0548,x=0.473µmol/mL, 計算丙酮酸含量得:

        丙酮酸含量(µmol/g 質(zhì)量) = x×V÷(V÷V×W) = x÷W =4.73mol/g 質(zhì)量。

        3、 吸取0.1mL的馬血清,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定= A空白-A測定-A對照=1.122-1.142-0.126=0.106,標曲y=1.4748x+0.0548,x=0.035µmol/mL, 計算丙酮酸含量得:

        丙酮酸含量(μmol/mL=x×V÷V= x =0.035 μmol/mL。

        4、 收集約500萬細胞,加入1mL提取液,超聲波破碎(功率 200w,超聲3s,間隔10s,重復30次),8000g,4℃離心10min,取上清待測。之后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定= A空白-A測定-A對照=1.122-0.949-0.113=0.286,標曲y=1.4748x+0.0548,x=0.157µmol/mL, 計算丙酮酸含量得:

        丙酮酸含量(μmol/106 cell= x ×V÷V÷V×5=0.2 x= 0.031 μmol/106 cell。

        相關系列產(chǎn)品:

        BC0380/BC0385  丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒

        BC0710/BC0715  α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

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        丙酮酸含量檢測試劑盒 三羧酸 丙酮酸含量檢測試劑盒 三羧酸

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