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        • 細(xì)胞鐵含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        細(xì)胞鐵含量檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-19
        細(xì)胞鐵含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Cell Iron Content Assay Kit
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5315
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途細(xì)胞鐵含量檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        細(xì)胞鐵含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        微量法

        貨號(hào):BC5315

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8保存

        試劑一

        液體5 mL×1

        2-8保存

        試劑二

        液體15 mL×1

        2-8保存

        試劑三

        液體2.5 mL×1

        2-8保存

        標(biāo)準(zhǔn)液

        液體1 mL×1

        2-8保存

        溶液的配制: 

        1. 標(biāo)準(zhǔn)液:1 μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液,臨用前取100μL 1μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液,加入100μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。(實(shí)驗(yàn)中每管需要20μL,為減小實(shí)驗(yàn)誤差,故配制大體積。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        元素是人體必須的微量元素之一,它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素及其他酶系統(tǒng)的主要成分,幫助氧的運(yùn)輸,促進(jìn)脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂,并影響機(jī)體的免疫功能。

        鹽酸羥胺將樣本中的Fe3+還原成Fe2+Fe2+在弱酸條件下與鄰菲羅啉形成橙紅色配合物,在510nm處有吸收峰,測(cè)定該波長(zhǎng)吸光度即可計(jì)算鐵含量。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、超聲破碎儀、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè))︰提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入0.5mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率200W,超聲3秒,間隔7秒,重復(fù)30次),于4℃,8000g離心10min,取上清待測(cè)。

        若樣本為真菌、細(xì)菌等有細(xì)胞壁的微生物可以適當(dāng)延長(zhǎng)超聲時(shí)間。

        二、測(cè)定步驟

        1. 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,波長(zhǎng)調(diào)至510nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2. 1.5mLEP/96孔板按下表步驟加樣:

         

        試劑名稱(μL

        測(cè)定管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        樣本

        20

        -

        -

        蒸餾水

        -

        20

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        20

        試劑一

        40

        40

        40

        試劑

        120

        120

        120

        試劑

        20

        20

        20

        充分混勻,25℃靜置顯色10min,于微量玻璃比色皿/96孔板中測(cè)定510nm處吸光值,分別記為A測(cè)定、A空白和A標(biāo)準(zhǔn),計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)只需做1-2次。

        三、細(xì)胞鐵含量計(jì)算

        1. 按細(xì)胞數(shù)目計(jì)算:

        細(xì)胞鐵含量(ng/104 cell =C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V提取×103×55.845÷500

        =27.922×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

        2. 按蛋白濃度計(jì)算

        細(xì)胞鐵含量(ng/mg prot =C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V提取×103×55.845÷Cpr×V提取)

        = 27922.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

        C標(biāo)準(zhǔn)液:0.5μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液;V提?。杭尤胩崛∫后w積,0.5mL;103:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1μmol=103nmol;55.845Fe的相對(duì)原子質(zhì)量,55.845ng/nmol;500:細(xì)胞數(shù)目,500萬(wàn);Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL。

        注意事項(xiàng):

        1、 如果ΔA測(cè)定0.01,可適當(dāng)加大樣本量后重新測(cè)定;如果測(cè)定管吸光值大于0.8,建議將樣本用蒸餾水適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式

        2、 如果按蛋白濃度計(jì)算細(xì)胞鐵含量,需自行測(cè)定樣本上清蛋白濃度。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 500萬(wàn)細(xì)胞加入0.5mL提取液進(jìn)行超聲破碎提取,離心取上清后按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.100-0.048=0.052ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.408-0.048=0.360,按細(xì)胞數(shù)目計(jì)算含量

        細(xì)胞鐵含量(ng/104 cell=27.922×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn) =4.033 ng/104 cell

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        BC1730/BC1735  血清鐵濃度檢測(cè)試劑盒

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         細(xì)胞鐵含量檢測(cè)試劑盒 微量法 細(xì)胞鐵含量檢測(cè)試劑盒 微量法

         


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