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        • 脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-19
        脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 微量法
        儲存條件
        2-8℃
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Lipid Peroxide (LPO) Content Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5245
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號:BC5245

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體11mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑三

        液體4mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        稀釋液

        液體20mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前取1瓶試劑二加入7mL 蒸餾水,此試劑較難溶,可以在70℃加熱并劇烈振蕩以促進(jìn)溶解,或者通過超聲處理以促進(jìn)溶解。每次用前需檢查是否有粉劑析出。用不完的試劑可在2-8℃中保存一個(gè)月。

        2. 標(biāo)準(zhǔn)品:為1000nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液

        產(chǎn)品說明:

        脂質(zhì)過氧化物(lipid hydroperoxide LPO)是不飽和脂肪酸鏈經(jīng)自由基或活性氧作用后產(chǎn)生的過氧化物。病理情況下,脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)可導(dǎo)致原本低含量的LPO升高。LPO含量升高會(huì)對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能造成損傷,LPO含量與機(jī)體免疫系統(tǒng)和衰老密切相關(guān)。

        LPO在酸性條件下加熱產(chǎn)生丙二醛(MDA),MDA與硫代巴*妥酸(Thiobarbituric acidTBA)縮合,生成棕紅色物質(zhì)三甲川(3,5,5-三甲基惡唑-2,4-二*),其最大吸收波長在 532nm,進(jìn)行比色后可估測樣本中LPO的含量。

         

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲波破碎儀、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、組織:按照樣本質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取

        液)加入提取液,冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        2、細(xì)菌或細(xì)胞樣本:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液)加入提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲 3s,間隔 7s,總時(shí)間3min),8000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        3、培養(yǎng)液或其他液體:直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測定。

        二、測定步驟

        1、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至532nm600nm,可見分光光度計(jì)需用蒸餾水調(diào)零。

        2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)液為1000nmol/mLMDA標(biāo)準(zhǔn)溶液,將標(biāo)準(zhǔn)液用稀釋液稀釋至20、10、5、2.51.25、0.625、0.31250.15625nmol/mL備用,具體稀釋可參考下表。

        序號

        稀釋前濃度(nmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        稀釋液體積(µL

        稀釋后濃度(nmol/mL

        1

        1000

        40

        960

        40

        2

        40

        500

        500

        20

        3

        20

        500

        500

        10

        4

        10

        500

        500

        5

        5

        5

        500

        500

        2.5

        6

        2.5

        500

        500

        1.25

        7

        1.25

        500

        500

        0.625

        8

        0.625

        500

        500

        0.3125

        9

        0.3125

        500

        500

        0.15625

        備注:實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需120µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        3、在EP管中按下表步驟加樣:

        試劑名稱

        測定管

        對照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本(μL

        120

        -

        -

        -

        蒸餾水(μL

        -

        120

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)液(μL

        -

        -

        120

        -

        稀釋液(μL

        -

        -

        -

        120

        試劑一(μL

        90

        90

        90

        90

        試劑二(μL

        60

        60

        60

        60

        試劑三(μL

        30

        30

        30

        30

             將混合液在 45℃(植物樣本)100℃(其他樣本)水浴60min 后(標(biāo)準(zhǔn)管在兩個(gè)溫度水浴均可),置于冰浴中冷卻,8000g,常溫,離心 10min。吸取200μL上清液于微量玻璃比色皿或 96 孔板中,測定各樣本在 532nm600nm處的吸光度。分別計(jì)算 ΔA=A532測定-A532對照-A600測定-A600對照),ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A532標(biāo)準(zhǔn)-A532空白-(A600標(biāo)準(zhǔn)-A600空白)(標(biāo)準(zhǔn)曲線,空白管和對照管只需做 1-2 次)。

        三、LPO含量的計(jì)算

        1. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,nmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(yΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔAyΔA)代入公式計(jì)算樣本濃度(x,nmol/mL

        2. 按樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

        LPO含量(nmol/mg prot= x×V÷Cpr×V樣)= x÷Cpr

        3. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        LPO含量(nmol/g 質(zhì)量)= x×V÷W×V÷V樣總)= x÷W

        4. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        LPO含量(nmol/104cell= x×V÷V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè)))= x÷細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè))

        5. 按照液體樣本體積計(jì)算

        LPO含量(nmol/mL= x

        V樣:加入樣本體積,0.12mL,V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g

        注意事項(xiàng):

        1. 待測液如果有密集小氣泡,建議靜置20min左右等待氣泡消失再測,以免影響測定結(jié)果,如果有少量氣泡可以通過低速離心或輕磕等方式來消除。

        2. 待測液如果尚未澄清,可吸取上清液后再次離心。

        3. 為防止水浴60min過程中水分散失,建議使用螺旋管或用封口膜給EP管纏口。

        4. 如果用高溫助溶試劑二,需要待其冷卻至室溫后再使用。

        5. 如果測定吸光值過低或接近空白,適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間或加大樣本量后,重新測定。如果吸光值過大或超過檢測范圍(A5321.5或者ΔA1.5時(shí)),建議將樣本適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測定。注意同步修改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 稱取0.1192 g綠蘿,加入1mL提取液,冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測,之后按照測定步驟操作,使用96孔板測定并進(jìn)行計(jì)算A532測定= 0.139A532對照= 0.042,A600測定= 0.054A600對照= 0.039,?A=0.082,將?A代入標(biāo)曲公式y = 0.0218x - 0.0054,R2=0.9997,得出x=4.009,按樣本質(zhì)量計(jì)算得:

        LPO含量(nmol/g 質(zhì)量)= x÷W = 33.63 nmol/g 質(zhì)量。

        2. 稱取0.1209g大鼠心臟,加入1mL提取液,冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測,之后按照測定步驟操作,使用96孔板測定并進(jìn)行計(jì)算A532測定 = 0.097,A532對照 = 0.047A600測定 =0.065,A600對照 = 0.042?A=0.027,將?A代入標(biāo)曲公式y = 0.0525x - 0.0007R2=0.9993,得出x=0.528,按樣本質(zhì)量計(jì)算得:

        LPO含量(nmol/g 質(zhì)量)= x÷W = 4.367 nmol/g 質(zhì)量。

        參考文獻(xiàn):

        Hiroshi Ohkawa, Nobuko Ohishi, Kunio Yagi, Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction[J], Analytical Biochemistry,1979.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0200/BC0205  過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒

        BC0090/BC0095  過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒

        BC0190/BC0195  多酚氧化酶(PPO)活性檢測試劑盒

        BC0210/BC0215  苯*酸解氨酶(PAL)活性檢測試劑盒


        脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 微量法 脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 微量法

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