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        您的位置: 網(wǎng)站首頁 > 產(chǎn)品中心 > 生化檢測試劑盒-常量法 > 氧化系列 > BC5240-50T/48S脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 氧化
        • 脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 氧化
        產(chǎn)品名稱:

        脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 氧化

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 氧化
        儲存條件
        2-8℃
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Lipid Peroxide (LPO) Content Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5240
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號:BC5240

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體20mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑三

        液體7mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        稀釋液

        液體20mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前取1瓶試劑二加入14mL 蒸餾水,此試劑較難溶,可以 70℃加熱并劇烈振蕩以促進溶解,或者通過超聲處理以促進溶解。每次用前需檢查是否有粉劑析出。用不完的試劑可在2-8℃中保存一個月。

        2. 標(biāo)準(zhǔn)品:為1000nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        產(chǎn)品說明:

        脂質(zhì)過氧化物(lipid hydroperoxide LPO)是不飽和脂肪酸鏈經(jīng)自由基或活性氧作用后產(chǎn)生的過氧化物。病理情況下,脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強可導(dǎo)致原本低含量的LPO升高。LPO含量升高會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能造成損傷,LPO含量與機體免疫系統(tǒng)和衰老密切相關(guān)。

        LPO在酸性條件下加熱產(chǎn)生丙二醛(MDA),MDA與硫代巴*妥酸(Thiobarbituric acidTBA)縮合,生成棕紅色物質(zhì)三甲川(3,5,5-三甲基惡唑-2,4-二*),其最大吸收波長在 532nm,進行比色后可估測樣本中LPO的含量。

         


        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1、組織:按照樣本質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        2、細(xì)菌或細(xì)胞樣本:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液)加入提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲 3s,間隔 7s,總時間3min),8000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        3、培養(yǎng)液或其他液體:直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。

        二、測定步驟

        1、可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至532600nm,用蒸餾水調(diào)零。

        2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)液為1000nmol/mLMDA標(biāo)準(zhǔn)溶液,將標(biāo)準(zhǔn)液用稀釋液稀釋至20、10、5、2.5、1.25、0.6250.3125、0.15625 nmol/mL備用,具體稀釋可參考下表。

        序號

        稀釋前濃度(nmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        稀釋液體積(µL

        稀釋后濃度(nmol/mL

        1

        1000

        40

        960

        40

        2

        40

        500

        500

        20

        3

        20

        500

        500

        10

        4

        10

        500

        500

        5

        5

        5

        500

        500

        2.5

        6

        2.5

        500

        500

        1.25

        7

        1.25

        500

        500

        0.625

        8

        0.625

        500

        500

        0.3125

        9

        0.3125

        500

        500

        0.15625

        備注:實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需400µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        3、在EP管中按下表步驟加樣:

        試劑名稱

        測定管

        對照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本(μL

        400

        -

        -

        -

        蒸餾水(μL

        -

        400

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)液(μL

        -

        -

        400

        -

        稀釋液(μL

        -

        -

        -

        400

        試劑一(μL

        300

        300

        300

        300

        試劑二(μL

        200

        200

        200

        200

        試劑三(μL

        100

        100

        100

        100

             將混合液在 45℃植物樣本)或100℃其他樣本)水浴60min 后(標(biāo)準(zhǔn)管在兩個溫度水浴均可),置于冰浴中冷卻,8000g,常溫,離心 10min。吸取 900μL 上清液于1mL玻璃比色皿中,測定各樣本在 532nm600nm處的吸光度。分別計算 ΔA=A532測定-A532對照-A600測定-A600對照),ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A532標(biāo)準(zhǔn)-A532空白- (A600標(biāo)準(zhǔn)-A600空白)(標(biāo)準(zhǔn)曲線,空白管和對照管只需做 1-2 次)。

        二、LPO含量的計算

        1. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(xnmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔAyΔA)代入公式計算樣本濃度(x,nmol/mL

        2. 按樣本蛋白質(zhì)濃度計算

        LPO含量(nmol/mg prot=x×V÷Cpr×V樣)= x÷Cpr

        3. 按樣本質(zhì)量計算

        LPO含量(nmol/g 質(zhì)量)=x×V÷W×V÷V樣總)= x÷W

        4. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計算

        LPO含量(nmol/104cell= x×V÷V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬個))= x÷細(xì)胞數(shù)量(萬個)

        5. 按照液體樣本體積計算

        LPO含量(nmol/mL= x

        V樣:加入樣本體積,0.4mL,V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。

        注意事項:

        1. 待測液如果有密集小氣泡,建議靜置20min左右等待氣泡消失再測,以免影響測定結(jié)果,如果有少量氣泡可以通過低速離心或輕磕等方式來消除。

        2. 待測液如果尚未澄清,可吸取上清液后再次離心。

        3. 為防止水浴60min過程中水分散失,建議使用螺旋管或用封口膜給EP管纏口。

        4. 如果用高溫助溶試劑二,需要待其冷卻至室溫后再使用。

        5. 如果測定吸光值過低或接近空白,適當(dāng)延長反應(yīng)時間或加大樣本量后,重新測定。如果吸光值過大或超過檢測范圍(A5321.5或者ΔA1.5),建議將樣本適當(dāng)稀釋后進行測定。注意同步修改計算公式。

        實驗實例:

        1. 稱取0.1192 g綠蘿葉片,按照測定步驟操作,測得計算A532測定= 0.143A532對照= 0.005,A600測定= 0.023,A600對照 = 0.004?A=0.119,將?A代入標(biāo)曲公式y =0.0289x + 0.0032,R2=0.9993,計算得x=4.007,按樣本質(zhì)量計算得:
        LPO含量(nmol/g 質(zhì)量)= x÷W = 33.616 nmol/g 質(zhì)量。

        2. 稱取0.1209g大鼠心臟,按照測定步驟操作,測得計算A532測定= 0.122,A532對照= 0.008,A600測定=0.051,A600對照= 0.003,?A=0.066,將?A代入標(biāo)曲公式y =0.0838x + 0.0045,R2=0.9989,得出x=0.734,按樣本質(zhì)量計算得:
        LPO含量(nmol/g 質(zhì)量)= x÷W = 6.071 nmol/g 質(zhì)量。

        參考文獻:

        Hiroshi Ohkawa, Nobuko Ohishi, Kunio Yagi,Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction[J],Analytical Biochemistry,1979.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0200/BC0205  過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒

        BC0090/BC0095  過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒

        BC0190/BC0195  多酚氧化酶(PPO)活性檢測試劑盒

        BC0210/BC0215  苯丙*酸解氨酶(PAL)活性檢測試劑盒

        脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 氧化 脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 氧化

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