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        • 多胺氧化酶(PAO)活性檢測試劑盒  微量法
        產品名稱:

        多胺氧化酶(PAO)活性檢測試劑盒 微量法

        產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-19
        多胺氧化酶(PAO)活性檢測試劑盒 微量法
        儲存條件
        2-8℃
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Polyamine Oxidase (PAO)Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5225
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途多胺氧化酶(PAO)活性檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合

        多胺氧化酶(PAO)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號:BC5225

        規(guī)格:100T/96S

        產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體15mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體1.3mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體1.3mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體1.1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制: 

        1、 工作液:臨用前根據實驗所需量按照試劑一:試劑二:試劑三=600μL60μL60μL(約5T的比例配制工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產品說明:

        多胺氧化酶(Polyamine Oxidases,PAO)是催化生物體內多胺氧化的關鍵酶,多胺能夠與核酸、蛋白質、細胞膜分子互作,直接影響細胞的生長、分化和凋亡,而PAO可通過調節(jié)細胞內多胺水平和生成物的濃度,參與各種植物體對逆境脅迫的反應和生長發(fā)育過程。

        PAO催化多胺氧化生成H2O2,過氧化物酶在有氧存在時催化H2O2分解,同時將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質,在500nm處有特征吸收峰,顏色深淺與PAO活性成線性關系。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標儀、天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺式低溫離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本的處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 組織:按照組織質量(g)︰提取液體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿。于4℃10000g離心10min,取上清,置于冰上待測。

        2. 細胞或細菌:按照細胞或細菌數(shù)量(104個)︰提取液體積mL500~10001的比例(建議500萬細胞或細菌加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞或細菌(功率200W,超聲3s,間隔7s,總時間3min),于4℃,10000g離心10min,取上清,置于冰上待測。

        3. 液體:直接測定。若有沉淀,離心后測定。

         

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至500nm,分光光度計蒸餾水調零。

        2、 測定前將工作液置于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱預熱10min以上

        3、操作表:在96孔板或EP管中分別加入下列試劑:

        試劑名稱(μL

        測定管

        空白管

        工作液

        140

        140

        試劑

        10

        10

        上清液

        50

        -

        蒸餾水

        -

        50

        充分混勻,于500 nm處測定30s吸光度A1,然后在37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱反應1h,測定1h 30s吸光度A2,計算ΔA=A2-A1??瞻坠苤恍枳?/span>1-2次。反應1h有沉淀,4離心后取上清測定。

        三、計算公式

        A. 96孔板計算:

        1. 按照樣本蛋白濃度計算

        酶活單位定義:在毫升反應體系中,每毫克蛋白每分鐘催化在500nm吸光值增加0.0005定義為一個酶活力單位。

        PAO活性(U/mg prot)=ΔA×V÷V×Cpr÷T÷0.0005×F=133.33×ΔA÷Cpr×F

        2. 按照樣本質量計算

        酶活單位定義:在每毫升反應體系中,每組織每分鐘催化在500nm吸光值增加0.0005定義為一個酶活力單位。

        PAO活性(U/g 質量)=ΔA×V÷W÷V×V÷T÷0.0005×F=133.33×ΔA÷W×F

        3. 按照細胞數(shù)量計算

        酶活單位定義:在每毫升反應體系中,每104 個細胞或細菌每分鐘催化在500nm吸光值增加0.0005定義為一個酶活力單位。

        PAO活性(U/104 cell)=ΔA×V÷500÷V×V÷T÷0.0005×F=0.2666×ΔA×F

        4. 按液體體積計算

        酶活單位定義:在每毫升反應體系中,每毫升液體樣本每分鐘催化在500nm吸光值增加0.0005定義為一個酶活力單位。

        PAO活性(U/mL)=ΔA×V÷V÷T÷0.0005×F=133.33×ΔA×F

        V反:反應總體積,0.2mL;V樣:加入樣本上清體積,0.05mL;V提:加入提取液的體積,1mL;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;500:細胞或細菌數(shù)量,500萬;T:反應時間,60min;F:稀釋倍數(shù)。

        B. 按比色皿計算:

        1. 按照樣本蛋白濃度計算

        酶活單位定義:在每毫升反應體系中,每毫克蛋白每分鐘催化在500nm吸光值增加0.001定義為一個酶活力單位。

        PAO活性(U/mg prot=ΔA×V÷V×Cpr÷T÷0.001×F=66.67×ΔA÷Cpr×F

        2. 按照樣本質量計算

        酶活單位定義:在每毫升反應體系中,每組織每分鐘催化在500nm吸光值增加0.001定義為一個酶活力單位。

        PAO活性(U/g 質量)=ΔA×V÷W÷V×V÷T÷0.001×F=66.67×ΔA÷W×F

         

        3. 按照細胞數(shù)量計算

        酶活單位定義:在每毫升反應體系中,每104 個細胞或細菌每分鐘催化在500nm吸光值增加0.001定義為一個酶活力單位。

        PAO活性(U/104 cell=ΔA×V÷500÷V×V÷T÷0.001×F=0.133×ΔA×F

        4. 按液體體積計算

        酶活單位定義:在每毫升反應體系中,每毫升液體樣本每分鐘催化在500nm吸光值增加0.001定義為一個酶活力單位。

        PAO活性(U/mL=ΔA×V÷V÷T÷0.001×F=66.67×ΔA×F

        V反:反應總體積,0.2mL;V樣:加入樣本上清體積,0.05mL;V提:加入提取液的體積,1mL;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;500:細胞或細菌數(shù)量,500萬;T:反應時間,60minF:稀釋倍數(shù)。

        實驗實例:

        1、 稱取0.1023g珍珠梅葉片加入1mL提取液進行樣本處理,離心取上清后按測定步驟操作,用96孔板測得A1=0.197A2=0.382,ΔA=A2-A1=0.185,根據計算公式得:

        PAO活性(U/g 質量)=133.33×ΔA÷W=133.33×0.185÷0.1023=241.115 U/g 質量

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