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        • β-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        β-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-03-22
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        β-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        β-Amylase(β-AL)Activity Assay Kit(Iodine-starch colorimetry)
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4585
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途β-淀*酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        β-淀*酶(β-AL)活性檢測試劑盒(碘-淀粉比色法)說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號:BC4585

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱                    

        規(guī)格                    

        保存條件                    

        試劑一                    

        粉劑×1                    

        2-8℃保存                    

        試劑二                    

        液體15mL×1                    

        2-8℃保存                    

        試劑三                    

        液體30 mL×1                    

        2-8℃保存                    

        標(biāo)準(zhǔn)品                    

        粉劑×1                    

        2-8℃保存                    

        溶液的配制:

        1、 試劑一:臨用前加入15mL試劑三,置于常溫水中并加熱至煮沸,期間不斷攪拌粉劑至溶解,用不完的試劑2-8保存8;

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:10 mg淀粉標(biāo)準(zhǔn)品。臨用前加10 mL試劑三,置沸水浴中振蕩溶解,配成1 mg/mL淀粉標(biāo)準(zhǔn)液。2-8保存周。

        產(chǎn)品說明:

        淀*酶負(fù)責(zé)水解淀粉,主要包括α-淀*酶和β-淀*酶。β-淀*酶(EC 3.2.1.2) 從淀粉的非還原端切開α-1,4糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。

        碘可以與未被淀*酶水解的淀粉結(jié)合,生成在570nm下有特征吸收峰的復(fù)合物,其深淺可計算出淀*酶的活力單位。α-AL熱不耐酸,β-AL耐酸不耐熱。根據(jù)上述特性,鈍化其中之一,就可測得另一種活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、組織:稱取約0.1g樣本,加1mL蒸餾水勻漿;勻漿后在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提??;6000g,常溫離心10min,吸取上清液即為淀*酶原液。

        2、液體:直接檢測。(若有渾濁則離心后測定)

        二、測定步驟

        1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至570nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

        2、 將淀粉標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.4、0.20.1、0.050.025、0.0125、0.00625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

         

        序號                    

        稀釋前濃度(mg/mL                    

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL                    

        蒸餾水體積(µL                    

        稀釋后濃度(mg/mL                    

        1

        1

        200

        300

        0.4

        2

        0.4

        200

        200

        0.2

        3

        0.2

        200

        200

        0.1

        4

        0.1

        200

        200

        0.05

        5

        0.05

        200

        200

        0.025

        6

        0.025

        200

        200

        0.0125

        7

        0.0125

        200

        200

        0.00625

        實(shí)驗(yàn)中每個標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        3、 按操作表依次加入各試劑:

        試劑名稱(μL                    

        α淀*酶活力測定                    

        總淀*酶活力測定                    

        空白管5

        標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定                    

        測定管1

        對照管2

        測定管3

        對照管4

        標(biāo)準(zhǔn)管6

        標(biāo)準(zhǔn)空白管7

        樣本                    

        100

        100

        -

        -

        -

        -

        -

        蒸餾水                    

        -

        -

        -

        -

        100

        -

        100

        標(biāo)準(zhǔn)溶液                    

        -

        -

        -

        -

        -

        100

        -

        70℃水浴15min左右,冷卻                    

        -

        樣本                    

        -

        -

        100

        100

        -

        -

        -

        試劑一                    

        100

        -

        100

        -

        100

        -

        -

        蒸餾水                    

        -

        100

        -

        100

        -

        100

        100

        40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min                    

        試劑二                    

        50

        50

        50

        50

        50

        50

        50

        混勻后吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中測定570nm下的吸光度,從左到右分別記為A1A2、A3A4、A5A6,計算ΔAα=A5-A1-A2),ΔA=A5-A3-A4),ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A6-A7??瞻坠?、標(biāo)準(zhǔn)曲線只需做1-2次。

        三、β-淀*酶活性計算

        標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,mg/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(yΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。將ΔAα測定帶入方程得到x1mg/mL),ΔA總代入方程得到x2mg/mL)。

        2α淀*酶活性的計算

        1)按照樣本質(zhì)量計算

        單位定義:每g組織每分鐘消耗1mg 淀粉定義為1個酶活力單位。

        α-淀*酶活性(U/g 質(zhì)量)=x1×V÷(W×V÷V樣總)÷T=0.2×x1÷W

        2)按照蛋白質(zhì)濃度計算

        單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

        α-淀*酶活性(U/mg prot)= x1×V÷V×Cpr÷T=0.2×x1÷Cpr

        3)按液體體積計算:

        單位定義:每mL液體每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

         

        α-淀*酶活性(U/mL)= x1×V÷V÷T=0.2×x1

        V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mLV樣總:樣本總體積,1mLCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,5min。

        3、總淀*酶活性的計算

        1)按照樣本質(zhì)量計算

        單位定義:每g組織每分鐘消耗1mg 淀粉定義為1個酶活力單位。

        總淀*酶活性(U/g 質(zhì)量)=x2×V÷(W×V÷V樣總)÷T=0.2×x2÷W

        2)按照蛋白質(zhì)濃度計算

        單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

        總淀*酶活性(U/mg prot)= x2×V÷V×Cpr÷T=0.2×x2÷Cpr

        3)按液體體積計算:

        單位定義:每mL液體每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

        總淀*酶活性(U/mL)= x2×V÷V÷T=0.2×x2

        V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;V樣總:樣本總體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,5min。

        4、β-淀*酶活性的計算

        1)按照樣本質(zhì)量計算

        單位定義:每g組織每分鐘消耗1mg 淀粉定義為1個酶活力單位。

        β-淀*酶活性(U/g 質(zhì)量)=淀*酶總活性-α-淀*酶活性=0.2×x2÷W-0.2×x1÷W

        2)按照蛋白質(zhì)濃度計算

        單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

        β-淀*酶活性(U/mg prot)=淀*酶總活性-α-淀*酶活性= 0.2×x2÷Cpr-0.2×x1÷Cpr

        3)按液體體積計算:

        單位定義:每mL液體每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

        β-淀*酶活性(U/mL)=淀*酶總活性-α-淀*酶活性=0.2×x2-0.2×x1

        注意事項(xiàng):

        吸光值大于1.5或者ΔA大于0.8時,可以對樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后測定。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        取約0.1g藜葉片進(jìn)行樣本處理,取上清液后按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔAα=A5-A1-A2=1.065-0.849-0.220=0.436ΔA=A5-A3-A4=1.065-0.677-0.197=0.585,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.628x-0.0051,計算x1=0.1678,x2=0.2245,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        β-淀*酶活性(U/g 質(zhì)量)=0.2×x2÷W-0.2×x1÷W=0.2×0.2245÷0.1-0.2×0.1678÷0.1=0.1134 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC4570/BC4575  α-淀*酶(α-AL)活性檢測試劑盒(碘-淀粉比色法)

         


         

        β-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法 β-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法

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