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        • α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性測試盒 糖代謝
        產(chǎn)品名稱:

        α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性測試盒 糖代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-03-23
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性測試盒 糖代謝
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        α-L-Arabinofuranosidase (α-L-Af) Activity Assay kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4760
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶α-L-Af活性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        貨號BC4760

        規(guī)格50T/24S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體80 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑二

        液體70 mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、試劑一:臨用前取1瓶加入2.667mL蒸餾水,充分溶解,用不完的試劑建議分裝后-20保存2周,避免反復(fù)凍融。

        2、標準品:5 µmol/mL的對-硝基苯*溶液。

        產(chǎn)品說明

        α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase,α-L-Af)屬于糖基水解酶家族,可以從含有阿拉伯糖殘基的多聚物如阿拉伯木聚糖、阿拉伯聚糖和阿拉伯半乳聚糖等的非還原末端水解生成一個L-阿拉伯糖分子。該酶在半纖維素降解以及果實的成熟軟化過程中有著重要作用。

        α-L-Af分解對硝基苯基-α-L-阿拉伯呋喃糖苷生成對-硝基苯*,-硝基苯*在400 nm處有最大吸收峰,通過測定400 nm處吸光值變化可計算得α-L-Af活性。


        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品

        可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、超聲破碎儀、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1、組織:按照組織質(zhì)量(g)︰提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進行冰浴勻漿,然后15000 g,4℃,離心10 min,取上清(若為綠色植物的莖、葉、芽等組織,建議將上清用提取液稀釋5倍后檢測;若為果肉等組織,上清可直接檢測或根據(jù)預(yù)測定結(jié)果稀釋相應(yīng)倍數(shù)后檢測)置于冰上待測。

        2、細胞或細菌:先收集細胞或細菌到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細胞或細菌數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬個細胞或細菌加入1 mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞或細菌(功率200 W,超聲3秒,間隔7秒,總時間3 min);然后15000 g4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測。

         

        3、液體:直接檢測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至400 nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 5 µmol/mL的對-硝基苯*標準液用提取液稀釋為250、12562.5、31.25、15.6257.8125 nmol/mL的標準溶液備用,標準液稀釋可參考下表:

        序號

        稀釋前濃度(nmol/mL

        標準液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(nmol/mL

        1

        5000

        40

        960

        250

        2

        250

        500

        500

        125

        3

        125

        500

        500

        62.5

        4

        62.5

        500

        500

        31.25

        5

        31.25

        500

        500

        15.625

        6

        15.625

        500

        500

        7.8125

        備注:實驗中每個標準管需300µL標準溶液。

        3、 操作表:(1.5 mL離心管中)

        試劑名稱(µL

        對照管

        測定管

        標準管

        空白管

        試劑一

        -

        200

        -

        -

        蒸餾水

        200

        -

        200

        500

        樣本

        300

        300

        -

        -

        標準溶液

        -

        -

        300

        -

        渦旋混勻,置于37℃水浴/恒溫培養(yǎng)箱中準確反應(yīng)30 min

        試劑二

        1000

        1000

        1000

        1000

        渦旋混勻,吸取1 mL1 mL玻璃比色皿中,測定400 nm處吸光值A,分別記為A對照管、A測定管A標準管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管,ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管,標準曲線和空白管只需檢測1-2次。

        三、α-L-Af活性計算

        1、 標準曲線的繪制:

        根據(jù)標準管的濃度(x,nmol/mL)和吸光度ΔA標準(y,ΔA標準),建立標準曲線。根據(jù)標準曲線,將ΔA測定(y,ΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(x,nmol/mL)。

        2、 α-L-Af活性的計算:

        1)按蛋白濃度計算

        酶活定義:每mg蛋白每小時產(chǎn)生1 nmol-硝基苯*為1個酶活力單位。

        α-L-Af酶活(U/mg prot= x×V提取÷V提取×Cpr÷T=2x÷Cpr

        2)按樣本質(zhì)量計算

        酶活定義:每g樣本每小時產(chǎn)生1 nmol-硝基苯*為1個酶活力單位。

        α-L-Af酶活(U/g 質(zhì)量)= x×V提取÷W÷T= 2x÷W

        3)按照細胞或細菌數(shù)量計算

        酶活定義:每104個細胞每小時產(chǎn)生1 nmol-硝基苯*為1個酶活力單位。

        α-L-Af酶活(U/104 cell= x×V提取÷細胞數(shù)量(萬個)÷T= 2x÷細胞數(shù)量(萬個)

        4)按液體體積計算

        酶活定義:每mL樣本每小時產(chǎn)生1 nmol-硝基苯*為1個酶活力單位。

        α-L-Af酶活(U/mL=x×V÷V÷T=2x

        V提?。禾崛∫后w積,1 mLV樣:加入的樣本體積,0.3 mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,0.5 h。

        注意事項

        1、 AΔA大于1時,建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定。

        2、 正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,若濃度過高,建議將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后再進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù);若濃度過低,建議在粗酶液提取時增加組織質(zhì)量。

        3、 加入試劑二后,建議5 min內(nèi)讀取OD值。

        實驗實例:

        1、 0.1g香蕉進行樣本處理,取上清后,按測定步驟操作,測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.234-0.105=0.129,帶入標準曲線y=0.0037x+0.0029,計算x=34.08按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        α-L-Af酶活(U/g 質(zhì)量)=2x÷W=2×34.08÷0.1=681.6 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC4440/BC4445  半纖維素含量檢測試劑盒

        BC2570/BC2575  α-半乳糖苷酶(α-GAL)活性檢測試劑盒

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        α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性測試盒 糖代謝 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性測試盒 糖代謝

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