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        • α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性測(cè)試盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性測(cè)試盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-03-23
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性測(cè)試盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        α-L-Arabinofuranosidase (α-L-Af) Activity Assay kit
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC4765
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Af)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

        微量法

        貨號(hào)BC4765

        規(guī)格100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體100 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑二

        液體35 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、試劑一:臨用前1加入1.37 mL蒸餾水,充分溶解,用不完的試劑建議分裝后-20℃保存2,避免反復(fù)凍融。

        2、標(biāo)準(zhǔn)品:5 µmol/mL的對(duì)-硝基苯*溶液。

        產(chǎn)品說(shuō)明

        α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase,α-L-Af)屬于糖基水解酶家族,可以從含有阿拉伯糖殘基的多聚物如阿拉伯木聚糖、阿拉伯聚糖和阿拉伯半乳聚糖等的非還原末端水解生成一個(gè)L-阿拉伯糖分子。該酶在半纖維素降解以及果實(shí)的成熟軟化過(guò)程中有著重要作用。

        α-L-Af分解對(duì)硝基苯基-α-L-阿拉伯呋喃糖苷生成對(duì)-硝基苯*,對(duì)-硝基苯*在400 nm處有最大吸收峰,通過(guò)測(cè)定400 nm處吸光值變化可計(jì)算得α-L-Af活性。


        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、超聲破碎儀、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、組織樣本的處理:按照組織質(zhì)量(g)︰提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后15000 g,4℃,離心10 min,取上清(若為綠色植物的莖、葉、芽等組織,建議將上清用提取液稀釋5倍后檢測(cè);若為果肉等組織,上清可直接檢測(cè)或根據(jù)預(yù)測(cè)定結(jié)果稀釋相應(yīng)倍數(shù)后檢測(cè))置于冰上待測(cè)。

        2、細(xì)胞或細(xì)菌的處理:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌加入1 mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌(功率200 W,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3 min);然后15000 g,4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測(cè)。

         

        3液體樣本的處理:直接檢測(cè)。

        二、測(cè)定步驟

        1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400 nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 5 µmol/mL的對(duì)-硝基苯*標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為500、250125、62.531.25、15.625 nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用,標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表:

        序號(hào)

        稀釋前濃度(nmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(nmol/mL

        1

        5000

        100

        900

        500

        2

        500

        200

        200

        250

        3

        250

        200

        200

        125

        4

        125

        200

        200

        62.5

        5

        62.5

        200

        200

        31.25

        6

        31.25

        200

        200

        15.625

        備注:實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需60µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        3、 操作表:(1.5 mL離心管中)

        試劑名稱(µL

        對(duì)照管

        測(cè)定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        試劑一

        -

        40

        -

        -

        蒸餾水

        40

        -

        40

        100

        樣本

        60

        60

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        60

        -

        渦旋混勻,置于37℃水浴/恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)30 min

        試劑二

        200

        200

        200

        200

        渦旋混勻,吸取200 µL于微量玻璃比色皿或96孔板中,測(cè)定400 nm處吸光值A,分別記為A對(duì)照管、A測(cè)定管A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管,標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需檢測(cè)1-2次。

        三、α-L-Af活性計(jì)算

        1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,nmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA測(cè)定(yΔA測(cè)定)帶入公式計(jì)算樣本濃度(x,nmol/mL)。

        2、 α-L-Af活性的計(jì)算:

        1)按蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:每mg蛋白每小時(shí)產(chǎn)生1 nmol對(duì)-硝基苯*為1個(gè)酶活力單位。

        α-L-Af酶活(U/mg prot=x×V提取÷V提取×Cpr÷T=2x÷Cpr

        2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:每g樣本每小時(shí)產(chǎn)生1 nmol對(duì)-硝基苯*為1個(gè)酶活力單位。

        α-L-Af酶活(U/g質(zhì)量)=x×V提取÷W÷T=2x÷W

        3)按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)產(chǎn)生1 nmol對(duì)-硝基苯*為1個(gè)酶活力單位。

        α-L-Af酶活(U/104 cell=x×V提取÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))÷T=2x÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè)

        4)按液體體積計(jì)算

        酶活定義:每mL樣本每小時(shí)產(chǎn)生1 nmol對(duì)-硝基苯*為1個(gè)酶活力單位。

        α-L-Af酶活(U/mL)=x×V÷V÷T2x

        V提?。禾崛∫后w積,1 mL;V樣:加入的樣本體積,0.06 mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間30 min。

        注意事項(xiàng)

        1、 AΔA大于1.2時(shí),建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

        2、 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,若濃度過(guò)高,建議將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后再進(jìn)行測(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù);若濃度過(guò)低,建議在樣本提取時(shí)增加組織質(zhì)量。

        3、 加入試劑二后,建議5 min內(nèi)讀取OD值。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g黑麥穗進(jìn)行樣本處理,取上清稀釋2倍后,按測(cè)定步驟操作,使用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.642-0.276=0.366,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0024x-0.0045,計(jì)算x=154.375,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        α-L-Af酶活(U/g 質(zhì)量)=2x÷W×2(稀釋倍數(shù))=2×154.375÷0.1×2(稀釋倍數(shù))=6175 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC4440/BC4445  半纖維素含量檢測(cè)試劑盒

        BC2570/BC2575  α-半乳糖苷酶(α-GAL)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2580/BC2585  β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2550/BC2555  α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2560/BC2565  β-葡萄糖苷酶(β-GC)活性檢測(cè)試劑盒

         α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性測(cè)試盒 微量法 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性測(cè)試盒 微量法

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