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        • 過氧化氫酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        過氧化氫酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-03-23
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        過氧化氫酶活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Catalase (CAT) Activity Assay Kit (Ammonium Molybdate-Chromogenic Method)
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4785
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途過氧化氫酶(CAT)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        ABTS自由基清除能力檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號:BC4775

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體80 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體40 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體20 μL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體1.5 mL×1

        -20℃保存

        試劑五

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制: 

        1、 試劑二:臨用前加入1 mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑可分裝保存,-20可保存,避免反復(fù)凍融;

        2、 試劑三工作液的配制:液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前根據(jù)樣本量按試劑三μL:蒸餾水(mL=1μL:12mL(注意單位)的比例配成試劑三工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配,用多少配多少,盡量在4h之內(nèi)用完;

        3、 試劑四工作液的配制:可先將試劑四-20分裝保存臨用前根據(jù)樣本量按試劑四:試劑一(V:V=1:9的比例配成試劑四工作液,現(xiàn)配現(xiàn)用,用不完的試劑放于-20℃可保存兩周。

        4、 試劑五:粉劑置于試劑瓶內(nèi)玻璃瓶中,含有5 mg維生素C,臨用前加入2.8 mL提取液,充分振蕩溶解;配成10 mmol/L維生素C溶液,用于陽性對照。2-8℃可保存兩周。

        5、 ABTS工作液的配制:臨用前根據(jù)試驗(yàn)所需量按試劑一:試劑二:試劑三工作液(V:V:V=76:5:4的比例配成ABTS工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配,室溫避光保存,務(wù)必在30分鐘內(nèi)使用

        產(chǎn)品說明:

        ABTS法可用于親水性和親脂性物質(zhì)抗氧化能力測定,是使用廣泛的間接檢測方法。ABTS經(jīng)氧化后生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽離子ABTS自由基,在405 nm734 nm處有最大吸收峰。被測物質(zhì)加入ABTS自由基溶液后,所含抗氧化成分能與ABTS自由基發(fā)生反應(yīng)而使反應(yīng)體系褪色,405 nm的吸光度下降,在一定范圍內(nèi)其吸光度的變化與自由基被清除的程度成正比。本試劑盒中,通過測定吸光度下降的程度來反映樣本清除ABTS自由基的能力。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、研缽/粉碎機(jī)、烘干箱、30~50目篩、冰、蒸餾水。

         

        操作步驟:

        一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、植物組織樣本的制備:將新鮮樣本置于60℃烘箱烘干至恒重,研缽研碎(或粉碎機(jī)粉碎),過30~50目篩;稱取約0.05 g樣本,加入1 mL提取液后置于40℃水浴鍋中浸提30 min10000 rpm 室溫離心10 min,取上清,置于冰上待測。

        2、紅酒、果汁等液體樣本:吸取100 μL樣本溶液加入900 μL提取液,旋渦振蕩混勻,室溫10000 rpm 離心10 min,取上清,置冰上待測。

        3、提取物或者藥物:可用提取液配制成一定濃度,如5 mg/mL。

        注意:不同樣本清除ABTS自由基的能力可能相差很大,為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,樣本要根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整(如清除率大于90%,建議將提取的樣本用提取液進(jìn)行稀釋;清除率小于5%,建議加大烘干樣本質(zhì)量或液體樣本體積進(jìn)行提?。?。

        二、測定步驟

        1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至405 nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

        2. 陽性對照的準(zhǔn)備:若需要線性關(guān)系,建議將10 mmol/L的維生素C溶液用提取液配制成0.4、0.20.1、0.05、0.0250.0125 mmol/L的維生素C溶液待用,稀釋可參考下表;若需要清除率約為90%的陽性對照,則建議將10 mmol/L維生素C溶液用提取液配制成大于0.5 mmol/L的維生素C溶液待用。

        序號

        稀釋前濃度(mmol/L

        維生素C溶液體積(µL

        提取液體積(µL

        稀釋后濃度(mmol/L

        1

        10

        100

        900

        1

        2

        1

        80

        120

        0.4

        3

        0.4

        100

        100

        0.2

        4

        0.2

        100

        100

        0.1

        5

        0.1

        100

        100

        0.05

        6

        0.05

        100

        100

        0.025


        0.025

        100

        100

        0.0125

        備注:實(shí)驗(yàn)中每個陽性對照10µL維生素C溶液。

        3. 操作表:在96孔板或EP管中分別加入下列試劑:

        試劑名稱(μL

        空白管

        測定管

        對照管

        陽性對照管

        上清液

        -

        10

        10

        -

        不同濃度的VC溶液

        -

        -

        -

        10

        蒸餾

        10

        -

        -

        -

        試劑四工作液

        20

        20

        -

        20

        ABTS工作液

        170

        170

        -

        170

        試劑一

        -

        -

        190

        -

        充分混勻,室溫避光靜置6 min。測定405 nm處的吸光度。分別記為A空白、A測定、A對照、A陽性對照,陽性對照管和空白管只需測1-2次。

         

        三、ABTS自由基清除率的計算

        1.  陽性對照的自由基清除率計算公式:

        ABTS自由基清除率DVC% =[(A空白-A陽性對照)÷A空白]×100%。

        2.  樣本的自由基清除率計算公式:

        ABTS自由基清除率D% =[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白×100%。

        注意事項(xiàng):

        1、不同樣本清除ABTS自由基的能力可能相差很大,如果要比較不同樣本的ABTS自由基清除能力,建議對于同一批樣本加入等量的樣本,紅酒、組織勻漿、果汁等液體樣本加入同樣體積,提取物(或者藥物)配制成同樣濃度。在比較時,將樣本根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,比較同樣濃度(相同稀釋倍數(shù))的清除率大小。

        2、樣本建議當(dāng)天提取當(dāng)天檢測。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.0502 g菠菜葉片加入1 mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,離心取上清后按照測定步驟操作,使用96孔板測定吸光值,計算清除率得:

        D% =[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白×100% =[0.69-(0.231-0.217)]÷0.69×100%=97.97%。

        2、 0.2 mmol/L VC陽性對照管按照測定步驟操作,使用96孔板測定吸光值,計算清除率得:

        DVC% =[(A空白-A陽性對照)÷A空白]×100% =[0.69-0.428]÷0.69×100%=37.97%。

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        過氧化氫酶活性檢測試劑盒 微量法 過氧化氫酶活性檢測試劑盒 微量法

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