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        • 肌酸含量檢測試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        肌酸含量檢測試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-03-23
        肌酸含量檢測試劑盒
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Creatine Content Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4925
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途肌酸含量檢測應用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        肌酸含量檢測試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC4925

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體10 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑一稀釋液

        液體5 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體2 mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:臨用前加入0.33mL乙醇溶解,-20℃可以保存2周,試劑若變?yōu)樯钭厣珓t不可再使用;

        2. 試劑一工作液:臨用前根據(jù)樣本量按試劑一:試劑一稀釋液=40μL560μL(共600μL,約15T)的比例進行配制,現(xiàn)配現(xiàn)用,當天用完;

        3. 標準品:1 mg一水肌酸。臨用前加入1 mL蒸餾水,充分溶解,即1 mg/mL一水肌酸標準儲備液。用不完的試劑4℃保存一個月。

        產(chǎn)品說明:

        肌酸(Creatine)是一種含氮化合物,自然存在于脊椎動物體內(nèi),能夠輔助為肌肉和神經(jīng)細胞提供能量。肌酸可由精*酸(arginine)、甘*酸(glycine)及甲硫*酸(methionine)三種氨基酸合成,可由人體自行合成,也可以從食物中攝取。大約95%的肌酸存在于骨骼肌中,主要存在形式為磷酸肌酸。肌酸作為一種補充劑主要通過增加肌肉質(zhì)量,增強運動表現(xiàn)能力。肌酸也被作為神經(jīng)肌肉疾病的一種治療藥被廣泛研究,它可能有助于保護神經(jīng)和改善細胞生物功能狀態(tài)。

        肌酸可在堿性條件下與聯(lián)乙酰-α-萘酚發(fā)生反應,生成紅色產(chǎn)物在530 nm處有吸收峰。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

        2. 細胞:按照細胞數(shù)量(106個):提取液一體積(mL)為5~101的比例(建議5×106個細胞加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于4℃12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

        3. 血清(漿)等液體:取100μL液體加入1mL提取液一,4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,12000g離心10min后取上清待測。

        注:提取液二需緩慢加入,加入后會產(chǎn)生大量氣泡,建議使用2mL EP管進行操作。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計/酶標儀預熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至530 nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 標準溶液配制:將1 mg/mL一水肌酸標準儲備液,用蒸餾水稀釋至200、160、130、10050、2512.5 μg/mL標準溶液待用。

        3、 按下表步驟加樣:

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        空白管

        標準管

        樣本

        20

        20

        -

        -

        蒸餾水

        -

        20

        20

        -

        標準溶液

        -

        -

        -

        20

        試劑一工作液

        40

        40

        40

        40

        試劑二

        20

        -

        20

        20

        室溫避光反應10 min

        蒸餾水

        120

        120

        120

        120

        充分混勻,于530 nm處測定吸光度。分別記為A測定、A對照、A空白、A標準。ΔA測定=A測定-A對照,ΔA標準=A標準-A空白。空白管和標準曲線只需進行1-2次。

        注:空白管只需做1-2次。

        三、肌酸含量計算

        1、 標準曲線繪制:以肌酸標準溶液濃度為橫坐標(x,μg/mL),以ΔA標準為縱坐標(y)繪制標準曲線,得到線性回歸方程y=kx+b,將ΔA測定帶入方程求得xμg/mL)。

        2、 計算公式

        1)按照蛋白濃度計算

        肌酸含量(μg/mg prot=x×V÷V×Cpr×0.879=x÷Cpr×0.879

        2)按照樣本質(zhì)量計算

        肌酸含量(μg/g 質(zhì)量)=x×V上清+V提取液二)÷ W×V上清÷V提取液一)×0.879=1.044×x÷W

        3)按照細菌或細胞數(shù)量計算

        肌酸含量(μg/104 cell= x×V上清+V提取液二)÷(細胞數(shù)量×V上清÷V提取液一)×0.879

        = 1.044×x÷細胞數(shù)量

        4)按照血清(漿)體積計算

        肌酸含量(μg/mL=x×V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷V提取液一+V液體)]×0.879=11.482×x

        V樣:加入樣本體積,20 μL=0.02 mL;V上清:提取液一提取時上清液體積,0.8 mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;細胞或細菌數(shù)量,以104計;V提取液一:加入提取液一體積,1 mL;V提取液二:

        加入提取液二體積,0.15 mL;V液體:液體樣本體積,0.1 mL;0.879:換算系數(shù),一水肌酸相對分子質(zhì)量149.15,無水肌酸相對分子質(zhì)量131.130.879=131.13÷149.15

        注意事項:

        1、顯色完成后,請在10 min之內(nèi)完成檢測。

        2、提取液中含有蛋白沉淀劑,提取的上清液不能用于蛋白濃度的測定。若想要用蛋白濃度計算肌酸含量需要另取樣本,即取相同質(zhì)量的組織、同等數(shù)目的細菌或細胞,用1.1875mLPBS(生理鹽水)勻漿;取相同體積的血清(漿),用1.206mLPBS(生理鹽水)勻漿(相當于提取步驟最終樣本上清液),用BCA法進行蛋白濃度測定。

        3、如果測定吸光值低于或超過標準溶液線性范圍的吸光值,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。

        4、試劑一、試劑二對人體有刺激性,請采取適當?shù)姆雷o措施。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴乳膠手套操作。

        實驗實例:

        0.1g兔腎臟加入1mL提取液一進行勻漿研磨離心,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清后按照測定步驟操作,用96孔板測定后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.128-0.064=0.064,帶入標準曲線y=0.0062x-0.0143,計算x=12.629。按樣本質(zhì)量計算含量得:

        肌酸含量(μg/g 質(zhì)量)=1.044×x÷W =131.85 μg/g 質(zhì)量。

        100μL牛血清加入1mL提取液一,離心取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清,之后按照測定步驟操作,用96孔板測定后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.271-0.07=0.201,帶入標準曲線y=0.0062x-0.0143,計算x=34.726。按照液體體積計算含量得:

        肌酸含量(μg/mL=11.482×x= 398.7 μg/mL

        肌酸含量檢測試劑盒

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