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        • 肌酸含量檢測(cè)試劑盒(酶法)  氮代謝
        產(chǎn)品名稱:

        肌酸含量檢測(cè)試劑盒(酶法) 氮代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-17
        肌酸含量檢測(cè)試劑盒(酶法) 氮代謝
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        Creatine Content Assay Kit (Enzymatic method)
        檢測(cè)方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC4930
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途肌酸含量檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        肌酸含量檢測(cè)試劑盒(酶法)說明書

        可見分光光度法

        貨號(hào):BC493

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體30 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體5 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四A

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四B

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        試劑一:臨用前每支加入1 mL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存。

        試劑二:臨用前每支加入0.2 mL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存。

        試劑三:臨用前每支加入0.5 mL蒸餾水(100T/48S),充分溶解。為方便儲(chǔ)存故多給一支。用不完的試劑分裝后-20℃保存。

        試劑四:臨用前根據(jù)試驗(yàn)所需用量,按照試劑四A液:試劑四B=1:1,充分混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        標(biāo)準(zhǔn)品:1 mg一水肌酸。臨用前加入1 mL蒸餾水,充分溶解,即1 mg/mL一水肌酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。臨用前取20μL80μL蒸餾水混合配制成200μg/mL作為標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        肌酸(Creatine)是一種含氮化合物,自然存在于脊椎動(dòng)物體內(nèi),能夠輔助為肌肉和神經(jīng)細(xì)胞提供能量。肌酸可由精*酸(arginine)、甘*酸(glycine)及甲硫*酸(methionine)三種氨基酸合成,可由人體自行合成,也可以從食物中攝取。大約95%的肌酸存在于骨骼肌中,主要存在形式為磷酸肌酸。肌酸作為一種補(bǔ)充劑主要通過增加肌肉質(zhì)量,增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)能力。肌酸也被作為神經(jīng)肌肉疾病的一種治療藥被廣泛研究,它可能有助于保護(hù)神經(jīng)和改善細(xì)胞生物功能狀態(tài)。

        肌酸酶偶聯(lián)肌氨酸氧化酶,可將肌酸轉(zhuǎn)化為甘*酸、甲醛、過氧化氫,過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安*比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在505nm 有特征吸收峰。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、超聲破碎儀。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、細(xì)菌、細(xì)胞樣本的制備:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)): 提取液一體積(mL)為500~1000 : 1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1 mL提取液一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300W,超聲3秒,間隔9秒,總時(shí)間5 min);于4℃,12000 g離心10 min,取0.8 mL上清液,再加入0.15 mL提取液二,4℃,12000 g離心10 min后取上清待測(cè)。

        2、組織樣本的制備:按照質(zhì)量(g: 提取液一體積(mL)1: 5~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃12000 g離心10 min,取0.8 mL上清液,再加入0.15 mL提取液二,4℃,12000 g離心10 min后取上清待測(cè)。

        3、血清(漿):取100 μL血清(漿)加入1 mL提取液一,4℃,12000 g離心10 min,取0.8 mL上清液,再加入0.15 mL提取液二,4℃12000 g離心10 min后取上清待測(cè)。

        二、測(cè)定步驟

        1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505 nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 按下表步驟加樣:

        試劑名稱(μL

        測(cè)定管

        對(duì)照管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        樣本

        50

        50

        -

        -

        蒸餾水

        -

        50

        50

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        -

        50

        試劑一

        50

        -

        50

        50

        充分混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)條件下,反應(yīng)10 min

        試劑二

        5

        5

        5

        5

        試劑三

        5

        5

        5

        5

        試劑四

        400

        400

        400

        400

        充分混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)條件下,顯色30 min

        蒸餾水

        500

        500

        500

        500

        充分混勻,測(cè)定505 nm處的吸光度。分別記為A測(cè)定、A對(duì)照、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。

        注:空白管只需做1-2次。

        三、肌酸含量計(jì)算

        1、 計(jì)算公式

        1)按照蛋白濃度計(jì)算

        肌酸含量(μg/mg prot=C標(biāo)×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)×V÷V×Cpr×0.879=175.8×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)÷Cpr

        2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

        肌酸含量(μg/g 質(zhì)量)=C標(biāo)×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)×V上清+V提取液二)÷W×V上清÷V提取液一)×0.879

        =208.76×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)÷W

        3)按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        肌酸含量(μg/104 cell) = C標(biāo)×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)×(V上清+V提取液二)÷(細(xì)胞數(shù)量×V上清÷V提取液一)×0.879

        = 208.76×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)÷細(xì)胞數(shù)量

        4)按照血清(漿)體積計(jì)算

        肌酸含量(μg/mL) =C標(biāo)×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)×(V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)]×0.879 =2296.39×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)

        C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,200 μg/mLV樣:加入樣本體積,50 μL=0.05mL;V上清:提取時(shí)上清液體積,0.8 mL;V提取液一:加入提取液一體積,1 mL;V提取液二:加入提取液二體積,0.15 mL;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;細(xì)胞數(shù)量:以104計(jì);V液體:液體樣本體積,0.1 mL;0.879:換算系數(shù),一水肌酸相對(duì)分子質(zhì)量149.15,無水肌酸相對(duì)分子質(zhì)量131.13,0.879=131.13÷149.15

        注意事項(xiàng):

        1、 顯色完成后,請(qǐng)?jiān)?/span>10 min之內(nèi)完成檢測(cè)。

        2、 提取液中含有蛋白沉淀劑,提取的上清液不能用于蛋白濃度的測(cè)定。若想要用蛋白濃度計(jì)算肌酐含量需要另取組織或血清(漿),即取相同質(zhì)量(體積)的組織(血清(漿))用1.1875mLPBS(生理鹽水)勻漿(相當(dāng)于提取步驟最終樣本上清液),用BCA法進(jìn)行蛋白濃度測(cè)定。

        3、 如果測(cè)定吸光值超過標(biāo)準(zhǔn)管吸光值,建議用蒸餾水稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。如果測(cè)定吸光值過小,建議增大樣本量后再進(jìn)行測(cè)定。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g大鼠肌肉加入1mL提取液一進(jìn)行勻漿研磨離心,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.752-0.012=0.74,ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.672-0.014=0.66。按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得:肌酸含量(μg/g 質(zhì)量)=208.76×ΔA ÷ΔA標(biāo)÷W =2340μg/g 質(zhì)量。

        2、 100μL牛血清加入1mL提取液一,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清,之后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.061-0.016=0.045,ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.672-0.014=0.66。按照液體體積計(jì)算含量得:肌酸含量(μg/mL=2296.39×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=156.57 μg/mL血清。

        肌酸含量檢測(cè)試劑盒(酶法)  氮代謝 肌酸含量檢測(cè)試劑盒(酶法)  氮代謝


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