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        • 肌酸含量檢測試劑盒(酶法) 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        肌酸含量檢測試劑盒(酶法) 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-17
        肌酸含量檢測試劑盒(酶法) 微量法
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        Creatine Content Assay Kit (Enzymatic method)
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4935
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途肌酸含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        肌酸含量檢測試劑盒(酶法)說明書

        微量法

        貨號:BC4935

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體10 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四A

        液體10 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四B

        液體10 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        試劑一:臨用前每支加入550 μL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存。

        試劑二:臨用前每支加入0.15 mL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存。

        試劑三:臨用前每支加入0.5 mL蒸餾水(100T/48S),充分溶解。為方便儲存故多給一支。用不完的試劑分裝后-20℃保存。

        試劑四:臨用前根據(jù)試驗(yàn)所需用量,按照試劑四A液:試劑四B=1:1,充分混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        標(biāo)準(zhǔn)品:1 mg一水肌酸。臨用前加入1 mL蒸餾水,充分溶解,即1 mg/mL一水肌酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液。臨用前取20μL80μL蒸餾水混合配制成200μg/mL作為標(biāo)準(zhǔn)溶液待測?,F(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        肌酸(Creatine)是一種含氮化合物,自然存在于脊椎動物體內(nèi),能夠輔助為肌肉和神經(jīng)細(xì)胞提供能量。肌酸可由精*酸(arginine)、甘*酸(glycine)及甲*氨酸(methionine)三種氨基酸合成,可由人體自行合成,也可以從食物中攝取。大約95%的肌酸存在于骨骼肌中,主要存在形式為磷酸肌酸。肌酸作為一種補(bǔ)充劑主要通過增加肌肉質(zhì)量,增強(qiáng)運(yùn)動表現(xiàn)能力。肌酸也被作為神經(jīng)肌肉疾病的一種治療藥被廣泛研究,它可能有助于保護(hù)神經(jīng)和改善細(xì)胞生物功能狀態(tài)。

        肌酸酶偶聯(lián)肌氨酸氧化酶,可將肌酸轉(zhuǎn)化為甘*酸、甲醛、過氧化氫,過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安*比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在505nm 有特征吸收峰

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、超聲破碎儀。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、細(xì)菌、細(xì)胞樣本的制備:按照細(xì)胞數(shù)量(104個): 提取液一體積(mL)為500~1000: 1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1 mL提取液一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300W,超聲3秒,間隔9秒,總時間5 min);于4℃,12000 g離心10 min,取0.8 mL上清液,再加入0.15 mL提取液二,4℃,12000 g離心10 min后取上清待測。

        2、組織樣本的制備:按照質(zhì)量(g: 提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃,12000 g離心10 min,取0.8 mL上清液,再加入0.15 mL提取液二,4℃,12000 g離心10 min后取上清待測。

        3、血清(漿):取100 μL血清(漿)加入1 mL提取液一,4℃ 12000 g離心10 min,取0.8 mL上清液,再加入0.15 mL提取液二,4℃12000 g離心10 min后取上清待測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至505 nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

        2、 按下表步驟加樣:

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        樣本

        20

        20

        -

        -

        蒸餾水

        -

        20

        20

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        -

        20

        試劑一

        20

        -

        20

        20

        充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)條件下,反應(yīng)10 min

        試劑二

        2

        2

        2

        2

        試劑三

        2

        2

        2

        2

        試劑四

        160

        160

        160

        160

        充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)條件下,顯色30 min。測定505 nm處的吸光度。分別記為A測定、A對照、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。ΔA測定=A測定-A對照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。

        注:空白管只需做1-2次。

        三、肌酸含量計算

        1、 計算公式

        1)按照蛋白濃度計算

        肌酸含量(μg/mg prot=C標(biāo)×V×ΔA÷ΔA標(biāo)÷V×Cpr×0.879=175.8×ΔA÷ΔA標(biāo)÷Cpr×0.879

        2)按照樣本質(zhì)量計算

        肌酸含量(μg/g 質(zhì)量)= C標(biāo)×ΔA÷ΔA標(biāo)×V上清+V提取液二)÷W×V上清÷V提取液一)×0.879

        = 208.76×ΔA÷ΔA標(biāo)÷W

        3)按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算

        肌酸含量(μg/104 cells=C標(biāo)×ΔA÷ΔA標(biāo)×V上清+V提取液二)÷(細(xì)胞數(shù)量×V上清÷V提取液一)×0.879

        =208.76×ΔA÷ΔA標(biāo)÷細(xì)胞數(shù)量

        4)按照血清(漿)體積計算

        肌酸含量(μg/mL) =C標(biāo)×ΔA÷ΔA標(biāo)×(V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)]×0.879 =2296.39×ΔA÷ΔA標(biāo)

        C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,200 μg/mL;V樣:加入樣本體積,20 μL=0.02mL;V上清:提取時上清液體積,0.8 mL;V提取液一:加入提取液一體積,1 mL;V提取液二:加入提取液二體積,0.15 mL;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;細(xì)胞數(shù)量:以萬計;V液體:液體樣本體積,0.1 mL;0.879:換算系數(shù),一水肌酸相對分子質(zhì)量149.15,無水肌酸相對分子質(zhì)量131.130.879=131.13÷149.15。

        注意事項(xiàng):

        1、 顯色完成后,請在10 min之內(nèi)完成檢測。

        2、 提取液中含有蛋白沉淀劑,提取的上清液不能用于蛋白濃度的測定。若想要用蛋白濃度計算肌酐含量需要另取組織或血清(漿),即取相同質(zhì)量(體積)的組織(血清(漿))用1.1875mLPBS(生理鹽水)勻漿(相當(dāng)于提取步驟最終樣本上清液),用BCA法進(jìn)行蛋白濃度測定。

        3、 如果測定吸光值超過標(biāo)準(zhǔn)管吸光值,建議用蒸餾水稀釋樣本后再進(jìn)行測定。如果測定吸光值過小,建議增大樣本量后再進(jìn)行測定。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例

        0.1g兔腎臟加入1mL提取液一進(jìn)行勻漿研磨離心,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清后按照測定步驟操作,用96孔板測得數(shù)據(jù)后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.108-0.074=0.034,ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.806-0.053=0.753。按樣本質(zhì)量計算含量得:

        肌酸含量(μg/g 質(zhì)量)=208.76×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =94.26μg/g 質(zhì)量。

        100μL牛血清加入1mL提取液一,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清,之后按照測定步驟操作,用96孔板測得數(shù)據(jù)后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.122-0.062=0.06,ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.806-0.053=0.753。按照液體體積計算含量得:

        肌酸含量(μg/mL=2296.39×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=282.98μg/mL血清。

         肌酸含量檢測試劑盒(酶法) 微量法 肌酸含量檢測試劑盒(酶法) 微量法


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