糖化血清蛋白（GSP）含量檢測試劑盒（NBT法）說明書

可見分光光度法

貨號：BC4940

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入0.8 mL試劑二，充分溶解，配制成10 mmol/L DMF標(biāo)準(zhǔn)液，2-8℃保存4周；再取40µL 10 mmol/L DMF標(biāo)準(zhǔn)液和60µL試劑二混合配制成成4 mmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。

產(chǎn)品說明：

血清葡萄糖與白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基發(fā)生非酶促糖化反應(yīng)，形成高分子酮胺結(jié)構(gòu)，在堿性條件下與硝基四氯唑藍反應(yīng)，生成紫紅色化合物甲臜。在530nm波長處比色，測定其OD值，與DMF標(biāo)準(zhǔn)比較，即可求得其含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、恒溫培養(yǎng)箱、低溫離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

血清（漿）：收集血清（漿）到離心管內(nèi)，按照血清（漿）體積（mL）∶試劑一體積（mL）= 10∶1的比例（建議吸取0.5 mL血清（漿）于EP管中，加入0.05 mL試劑一），充分混勻，于37℃保溫30 min。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至530 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液：按照標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（mL）：試劑一體積（mL）= 10∶1的比例（建議吸取0.5 mL 4 mmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液于EP管中，加入0.05 mL試劑一），充分混勻，于37℃保溫30 min。

3、 按下表步驟加樣：

注：空白管和標(biāo)準(zhǔn)空白管均只需做1-2次。

三、糖化血清蛋白含量計算

糖化血清蛋白含量（mmol/L）=C×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F= 4×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F

C：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，4 mmol/L；F：稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1、顯色完成后，應(yīng)立即加入試劑四；建議一次性不要做太多樣本，防止試劑四加入不及時導(dǎo)致測定結(jié)果受到影響。

2、如果測定吸光值A(chǔ)＞1.0或ΔA＞0.8，建議稀釋樣本后再測定，計算公式中乘以稀釋倍數(shù)；如果測定吸光值較低或接近空白OD值，建議增加操作表中的樣本量后再進行測定（空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、標(biāo)準(zhǔn)空白管需要增加至相同體積量）。

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