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        • 海藻糖合成酶(TS)活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        海藻糖合成酶(TS)活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-17
        海藻糖合成酶(TS)活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Trehalose synthase (TS) Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4945
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途海藻糖合成酶(TS)活性檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        海藻糖合成酶(TS)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC4955

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體6mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑三

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前取一瓶先加入6mL蒸餾水,震蕩使其充分溶解(若溶解后的試劑中有黑色顆粒物,可離心后取上清使用),用不完的試劑2-8℃保存2周。

        2、 工作液的配制:臨用前將試劑三和試劑四1:1等體積混合,根據(jù)樣本實際所需用量現(xiàn)配現(xiàn)用。

        3、 標準品:臨用前加入1 mL蒸餾水配制成50 μmol/mL的麥芽糖標準溶液,用不完的試劑2-8℃保存2周。然后用蒸餾水八倍稀釋成6.25 μmol/mL的麥芽糖標準溶液(建議吸取25 μL 50μmol/mL麥芽糖標準溶液,加入175 μL蒸餾水中,充分混勻)待測,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        海藻糖是功能性低聚糖,具有非還原性、保濕性、熱酸穩(wěn)定性、抗凍結(jié)性等特性,是細胞在不良環(huán)境條件下產(chǎn)生的一種重要的抗逆應激物之一,它對生物大分子和生物組織有著非特異性的保護作用。

        海藻糖合成酶(Trehalose Synthase,TS)能催化麥芽糖生成海藻糖,是海藻糖生物合成的關(guān)鍵途徑之一。本試劑盒使用糖化酶分解剩余麥芽糖為葡萄糖,通過葡萄糖氧化酶法測定葡萄糖含量,按照麥芽糖減少的量表示海藻糖合成酶的活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、

         

        蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬細菌或細胞加入1 mL提取液,超聲波破碎細胞(功率200W,超聲3s,間隔9s,重復30次);然后8000 g,4℃,離心10 min,取上清(若上清不夠澄清,建議重復上述離心步驟),置于冰上待檢。

        組織:按照組織質(zhì)量(g: 提取液體積(mL)為1 : 5~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液),進行冰浴勻漿。8000 g,4℃,離心10 min,取上清(若上清不夠澄清,建議重復上述離心步驟,置于冰上待檢。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計/酶標儀預熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至505 nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 操作表:

        1)酶促反應(在EP管中進行以下操作):

        加入試劑(μL

        對照管

        測定管

        標準管

        空白管

        樣本

        50

        50

        -

        -

        試劑一

        -

        50

        -

        -

        標準溶液

        -

        -

        50

        -

        蒸餾水

        -

        -

        50

        100

        充分混勻,35℃水浴反應2 h,沸水浴5 min終止反應,冷卻至室溫。

        -

        -

        試劑一

        50

        -

        -

        -

        試劑二

        100

        100

        100

        100

        混勻,40℃過夜反應(12 h以上),沸水浴5 min終止反應,冷卻至室溫。10000 g ,25℃離心10 min,取上清待測。

        2)顯色反應(在EP管或96孔板中進行以下操作)

        加入試劑(μL

        對照管

        測定管

        標準管

        空白管

        上清液

        20

        20

        20

        20

        工作液

        180

        180

        180

        180

        充分混勻,37℃反應30 min,于微量玻璃比色皿或96孔板中測定505 nm處的吸光值,分別記為A對照、A測定、A標準與A空白,ΔA測定=A對照-A測定、ΔA標準=A標準-A空白。

        注:空白管和標準管只需測1~2次。

        三、酶活性計算

        1、按樣本蛋白濃度計算:

        單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個酶活力單位。

        TS活(U/mg prot= C×ΔA測定÷ΔA標準×V÷V×Cpr÷T×F×1000÷2

        =26.041×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr×F

        2、按樣本質(zhì)量計算:

        單位的定義:每g組織每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個酶活力單位。

        TS活(U/g 質(zhì)量)= C×ΔA測定÷ΔA標準×V÷V÷V樣總×W÷T×F×1000÷2

        =26.041×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F

         

        3、按細菌或細胞數(shù)量計算:

        單位的定義:每104個細菌或細胞每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個酶活力單位。

        TS活(U/104 cell= C×ΔA測定÷ΔA標準×V÷V÷V樣總×cell÷T×F×1000÷2

        =26.041×ΔA測定÷ΔA標準÷cell×F

        C標:標準管濃度,6.25 μmol/mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;V樣:加入樣本體積,0.05 mLT:反應時間,120 minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;cell:細胞或細菌總數(shù),以萬計;F:稀釋倍數(shù);1000:單位換算系數(shù),1 μmol=1000 nmol;21分子麥芽糖可轉(zhuǎn)化為2分子葡萄糖。

        注意事項:

        1、 當吸光值大于1.5或者ΔA測定大于1時,建議將樣本稀釋后測量。計算公式注意乘以稀釋倍數(shù)。

        實驗實例:

        1、 0.1 g小鼠肝臟加入1 mL提取液進行勻漿研磨,取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作,用96孔板測定后計算ΔA測定=A對照-A測定=1.177-0.536=0.641、ΔA標準=A標準-A空白=1.031-0.049=0.982,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        TS活(U/g 質(zhì)量)= 26.041×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F=339.965 U/g 質(zhì)量。

        2、 0.1 g海帶加入1 mL提取液進行勻漿研磨,取上清按照測定步驟操作,用96孔板測定后計算ΔA測定=A對照-A測定=1.366-0.793=0.573ΔA標準=A標準-A空白=1.031-0.049=0.982,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        TS活(U/g質(zhì)量)= 26.041×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F=151.950 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0330/BC0335 海藻糖含量檢測試劑盒

        BC2510/BC2515 海藻糖酶(THL)活性檢測試劑盒

        海藻糖合成酶(TS)活性檢測試劑盒 微量法 海藻糖合成酶(TS)活性檢測試劑盒 微量法

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