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        • 硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒 氮代謝
        產(chǎn)品名稱:

        硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒 氮代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-17
        硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒 氮代謝
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Nitrate Reductase (NR) Assay Kit(Griess-Colorimetric Method)
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4960
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途硝酸還原酶(NR)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        硝酸還原酶NR活性檢測試劑盒Griess顯色法)說明書

        可見分光光度法

        貨號:BC4960

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        誘導(dǎo)劑儲備液

        液體50 mL×1

        2-8℃保存

        提取液

        液體30mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體12 mL×1

        -20℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑三

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 誘導(dǎo)液:將誘導(dǎo)劑儲備液用蒸餾水10倍稀釋后使用,即取10 mL誘導(dǎo)劑儲備液加90 mL蒸餾水,充分混勻?,F(xiàn)配現(xiàn)用。

        2、 試劑二:加入1mL蒸餾水,-20℃分裝保存,可以-20℃保存2周。臨用前用蒸餾水將試劑二稀釋50倍,備用,即取10 μL試劑二加入490 μL蒸餾水混勻。

        3、 標(biāo)準(zhǔn)品:10 μmol/mL亞硝*標(biāo)準(zhǔn)溶液。臨用前將用蒸餾水標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋100倍得到0.1 μmol/mL的亞硝*標(biāo)準(zhǔn)液,備用。

        產(chǎn)品說明:

        NREC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶,也是誘導(dǎo)酶,對作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。NR催化硝酸鹽還原為亞*鹽,NO3ˉ +NADH+H→NO2ˉ+NAD+H2O。在酸性條件下,產(chǎn)生的NO2ˉ能夠參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物,這種紫紅色化合物在540 nm處有吸收峰,540 nm下吸光值的變化即可表示酶活。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、水浴鍋/培養(yǎng)箱、臺式離心機、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1、組織前處理:

        1) 取適量誘導(dǎo)于燒杯中,將新鮮標(biāo)本洗凈,濾紙吸干,放入誘導(dǎo)液中(淹沒即可),避光浸泡2 h,取出樣本,濾紙吸干后,-20℃冷凍30 min,取出樣本,濾紙吸干。(根據(jù)需要進行誘導(dǎo)處理,一般不需要誘導(dǎo)處理,預(yù)實驗結(jié)果沒有活性則需要進行誘導(dǎo)處理)

         

        2) 按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)1:5~10的比例(稱取約0.1 g樣本,加入1 mL提取液),冰浴研磨,8000g4℃離心10 min,取上清置冰上待測。

        2、細胞或細菌的前處理:

        先收集細胞或細菌樣本到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。8000g,4離心10min,取上清,置冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至540 nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 樣本測定:

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        100

        100

        -

        -

        0.1 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        100

        -

        蒸餾水

        -

        375

        -

        475

        試劑一

        375

        -

        375

        -

        試劑二

        125

        125

        125

        125

        混勻,37℃(哺乳動物)25℃(其他物種)反應(yīng)30 min

        試劑三

        250

        250

        250

        250

        試劑四

        250

        250

        250

        250

        混勻,室溫顯色20 min后測定540nm下的吸光度,分別記為A測定、A對照、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白。

        三、NR活性計算

        1)按樣本蛋白濃度計算:

        酶活定義:每小時每mg組織蛋白催化產(chǎn)生1 μmol NO2-的量為1NR活力單位。

        NR活力(U/mg prot= C標(biāo)準(zhǔn)×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V樣本÷V樣本×Cpr÷T×F

        = 0.2×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷Cpr×F

        2)按樣本質(zhì)量計算:

        酶活定義:每小時每g組織催化產(chǎn)生1 μmol NO2-的量為1NR活力單位。

        NR活力(U/g 質(zhì)量)=C標(biāo)準(zhǔn)×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V樣本÷W×V樣本÷V提取)÷T×F

        = 0.2×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W×F

        3)按細胞數(shù)量計算:

        酶活定義:每小時每1萬個細胞或細菌催化產(chǎn)生1 μmol NO2-的量為1NR活力單位。

        NR活力(U/104 cell

        =C標(biāo)準(zhǔn)×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V樣本÷(細胞或細菌數(shù)量×V樣本÷V提?。?/span>÷T×F

        =0.2×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷細胞或細菌數(shù)量×F

        C標(biāo)準(zhǔn):亞硝 *標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,0.1 μmol/mL;V提?。杭尤胩崛∫后w積,1 mL;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時間,0.5 hCpr:樣本蛋白濃度,mg/mLV樣本:加入的樣本體積,0.1 mL;細胞或細菌數(shù)量:以萬計;F:樣本稀釋倍數(shù)。

        注意事項:

        1. 吸光度大于0.8時,建議用提取液稀釋樣本,注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。

        2. 嚴(yán)格按照樣本測定表格列出順序加入試劑進行實驗。

        實驗實例:

        1. 0.1 g綠蘿葉片加入1 mL提取液進行勻漿研磨,離心取上清按照測定步驟操作,測得A測定=0.072、A對照=0.051A標(biāo)準(zhǔn)=0.363、A空白=0.005,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        NR活力(U/g 質(zhì)量)= 0.2×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W= 0.117 U/g 質(zhì)量。

        2. 0.1 g洋桔梗葉片加入1 mL提取液進行勻漿研磨,離心取上清按照測定步驟操作,測得A測定=0.063、A對照=0.032A標(biāo)準(zhǔn)=0.363、A空白=0.005,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        NR活力(U/g 質(zhì)量)= 0.2×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W= 0.173 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0070/BC0075  谷*酸合成酶(GOGAT)活性檢測試劑盒

        BC0910/BC0915  谷氨*胺合成酶(GS)活性檢測試劑盒

        BC1500/BC1505  植物硝態(tài)氮含量檢測試劑盒

        BC1520/BC1525  植物氨態(tài)氮含量檢測試劑盒

        硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒 氮代謝 硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒 氮代謝

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