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        • 微生物及液體S本中甲醛脫氫酶盒 微量法
        產(chǎn)品名稱(chēng):

        微生物及液體S本中甲醛脫氫酶盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-07
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱(chēng)
        Formaldehyde Dehydrogenase (FDH) Activity Assay kit (Microbiological and Liquid Samples)
        檢測(cè)方法
        微量法
        微生物及液體S本中甲醛脫氫酶盒 微量法

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢(xún)
        分子式詳詢(xún)純度詳詢(xún)
        分子量詳詢(xún)貨號(hào)BC4995
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途甲醛脫氫酶存在于絕大多數(shù)原核生物以及所有的真核生物中,是一種將甲醛進(jìn)行轉(zhuǎn)換的氧化應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        微生物及液體樣本中甲醛脫氫酶(FDH)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        微量法

        貨號(hào):BC4995

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員

        試劑名稱(chēng)

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體15mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑四

        液體2 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前1加入0.25 mL蒸餾水,震蕩使其充分溶解1瓶粉劑溶解后可做100T,為了延長(zhǎng)使用時(shí)間,此產(chǎn)品多給1瓶粉劑),可分裝后-20℃保存2周,避免反復(fù)凍融。

        2、 試劑二工工作液:臨用前按試劑二:蒸餾水=1:29體積比例稀釋試劑二,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        3、 試劑三:臨用前取1加入0.6 mL蒸餾水,震蕩使其充分溶解。用不完的試劑2-8℃分裝保存2周。

        產(chǎn)品說(shuō)明

        甲醛脫氫酶存在于絕大多數(shù)原核生物以及所有的真核生物中,是一種將甲醛進(jìn)行轉(zhuǎn)換的氧化還原酶。甲醛脫氫酶催化甲醛和 NAD+產(chǎn)生 NADH,在 340nm 處的吸光值會(huì)增加,測(cè)定 340nm處的吸光值變化,可計(jì)算得到甲醛脫氫酶的活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96UV板、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、超聲波細(xì)胞破碎儀、蒸餾水。

        操作步驟

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1 mL提取液,超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3s,間隔9s,總時(shí)間 3 min);然后8000 g,4℃,離心10 min,取上清(若上清不夠澄清,建議重復(fù)上述離心步驟),置于冰上待測(cè)。

        血清及液體樣本:直接檢測(cè)。

        二、測(cè)定步驟

        1、 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340 nm分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2、 臨用前將試劑置于37℃預(yù)熱10 min。

        3、 在微量石英比色皿或96UV板中依次加入 20 μL 樣本、110 μL試劑一、50 μL試劑二工作液、10 μL試劑三、10 μL試劑四,充分混勻后于340nm處測(cè)定20s時(shí)的吸光值A1,迅速置于37℃水浴或培養(yǎng)箱5min(酶標(biāo)儀有控溫功能可將溫度調(diào)至37℃),拿出迅速擦干測(cè)定5min20s時(shí)的吸光值A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。

         

        三、酶活性計(jì)算

        A、按微量石英比色皿計(jì)算

        1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中FDH活力的計(jì)算

        1)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

        單位的定義:每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化1 nmol NAD+生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        FDH活(U/104 cell=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V÷V樣總×N÷T×F =321.54×ΔA÷N×F

        2)按蛋白濃度計(jì)算:

        單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化1 nmol NAD+生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        FDH活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×Cpr÷T×F=321.54×ΔA÷Cpr×F

        2、血清(漿)或液體樣本FDH活力的計(jì)算

        1)按液體體積計(jì)算:

        單位的定義:每mL液體樣本中每分鐘催化1 nmol NAD+生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        FDHU/mL=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V÷T×F =321.54×ΔA×F

        2)按蛋白濃度計(jì)算:

        單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化生成1 nmol NAD+生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        FDH活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×Cpr÷T×F=321.54×ΔA÷Cpr×F

        eNADH 摩爾消光系數(shù),6220 L/ mol/cm;d石英比色皿光徑,1cm;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;V反總:酶促反應(yīng)總體積,2×10-4L;V樣總:加入提取液體積,1 mL;V樣:加入樣本體積,0.02 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;N:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),以萬(wàn)計(jì);F:稀釋倍數(shù);109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109 nmol

        B、按96UV板計(jì)算

        將上述公式中d=1cm變?yōu)?/span>d=0.6cm,代入公式進(jìn)行計(jì)算即可。

        注意事項(xiàng):

        1、如果測(cè)定吸光值A1.5ΔA0.5,建議稀釋樣本后再測(cè)定,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù);如果測(cè)定吸光值較低,建議增加樣本量后再進(jìn)行測(cè)定。

        2、試劑四有毒性,實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)佩戴口罩手套等防護(hù)措施。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g大腸桿菌沉淀加入1 mL提取液,超聲波破碎細(xì)胞(功率300W,超聲3s,間隔9s,總時(shí)間 3min);然后8000 g,4℃,離心10 min,取上清按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.2523-0.0396=0.2127按細(xì)菌數(shù)量計(jì)算酶活得:

        FDH活(U/104 cell= 321.54×ΔA÷N =683.9 U/g。

        2、 0.02 mL牛血清按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA =A2 -A1 =0.1101-0.0772=0.0329,按液體體積計(jì)算酶活得:

        FDH活(U/mL=321.54×ΔA=10.579 U/mL。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC4970/BC4975 植物組織中甲醛脫氫酶(FDH)活性檢測(cè)試劑盒

        BC4980/BC4985 動(dòng)物組織中甲醛脫氫酶(FDH)活性檢測(cè)試劑盒

        微生物及液體S本中甲醛脫氫酶盒 微量法 微生物及液體S本中甲醛脫氫酶盒 微量法

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