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        • α-甘露糖苷酶活性檢測(cè)試劑盒 糖代謝
        產(chǎn)品名稱:

        α-甘露糖苷酶活性檢測(cè)試劑盒 糖代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-07
        α-甘露糖苷酶活性檢測(cè)試劑盒 糖代謝
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        α-Mannosidase(α-man)Activity Assay kit
        檢測(cè)方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5040
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途α-甘露糖苷酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        α-甘露糖苷酶(α-man)活性檢測(cè)試劑盒說明書

        可見分光光度法

        貨號(hào)BC5040

        規(guī)格50T/24S

        產(chǎn)品內(nèi)容使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體50 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑三

        液體20 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        3mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前每支加入1mL 試劑四溶解,溶解后的試劑在-20℃分裝保存,可以保存4周。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:5mmol/L的對(duì)硝 基苯*標(biāo)準(zhǔn)液。

        產(chǎn)品說明

        α-man分布廣泛、種類繁多,在真核生物胞質(zhì)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體中都有發(fā)現(xiàn),不同種類、功能的α-man共同參與N-聚糖的修飾過程。

        α-man和特定底物發(fā)生反應(yīng),其生成物405nm處有特征吸收峰,根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出α-man活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品

        可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、勻漿器/研缽、冰和蒸餾水。

        操作步驟

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、組織:按照組織質(zhì)量(g)︰提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后12000 g,4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測(cè)。

        2、細(xì)胞或細(xì)菌:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌加入1 mL提取液)進(jìn)行提取,冰浴超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌(功率200 W,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3 min);然后12000 g,4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測(cè)。

        3、液體:直接檢測(cè)。若有渾濁可以離心后測(cè)定

        二、測(cè)定步驟

        1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至405 nm,蒸餾水調(diào)零。

         

        2、 5mmol/L的對(duì)硝基 苯*標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.0195、0.01、0.005mmol/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

        3、 操作表:(1.5 mL離心管中)

        試劑名稱(µL

        測(cè)定

        對(duì)照

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        125

        125

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        125

        -

        試劑一

        550

        625

        625

        625

        試劑二

        75

        -

        -

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        125

        混勻,37℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)10 min

        試劑三

        250

        250

        250

        250

        混勻,測(cè)定405 nm處吸光值A,分別記為A測(cè)定管、A對(duì)照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管,標(biāo)準(zhǔn)曲線、空白管只需檢測(cè)1-2次。

        三、α-甘露糖苷酶(α-man)活性計(jì)算

        1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程ykx+b,將ΔA帶入方程得到xmmol/L,即μmol/mL)。

        2、 α-甘露糖苷酶活性的計(jì)算:

        1)按蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基 苯*為1個(gè)酶活力單位。

        α-甘露糖苷酶酶活(U/mg prot= x× V÷V×Cpr÷T×F= x×0.1÷ Cpr ×F

        2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:每g樣本每分鐘產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基 苯*為1個(gè)酶活力單位。

        α-甘露糖苷酶酶活(U/g質(zhì)量)= x× V÷W×V÷V提?。?/span>÷T×F= x×0.1÷W×F

        3)按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基 苯*為1個(gè)酶活力單位。

        α-甘露糖苷酶酶活(U/104 cell= x× V÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V提?。?/span>÷細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè))÷T×F
        = x×0.1÷ 細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè))×F

        4)按液體體積計(jì)算

        酶活定義:每mL樣本每分鐘產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基 苯*為1個(gè)酶活力單位。

        α-甘露糖苷酶酶活(U/mL)=x×V÷V÷T×F= x×0.1×F

        V提?。禾崛∫后w積,1 mL;V樣:加入的樣本體積,0.125 mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間,10 min F:稀釋倍數(shù)。

        注意事項(xiàng)

        1、如果測(cè)定吸光值A1.5ΔA1,建議稀釋樣本后再測(cè)定,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù);如果測(cè)定吸光值較低或接近空白OD值,建議增加樣本量后再進(jìn)行測(cè)定。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例

        1、 稱取0.1 g兔子肝臟組織,加入1 mL提取液,冰浴勻漿,12000 g,4℃條件下離心10 min;取上清置于冰上待測(cè)。使用1mL玻璃比色皿按照測(cè)定步驟操作,計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.404-0.309=0.095,標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.0294x+ 0.0092,計(jì)算x=0.0422,按公式計(jì)算活性:

        α-甘露糖苷酶活(U/g 質(zhì)量)= x×0.1÷W×F = 0.0422U/g質(zhì)量

        2、 稱取0.1 g草莓果肉,加入1 mL提取液,冰浴勻漿,12000 g,4℃條件下離心10 min;取上清置于冰上待測(cè)。使用1mL玻璃比色皿按照測(cè)定步驟操作,計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.113-0.091=0.022,標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.0294x+ 0.0092,計(jì)算x=0.0063,按公式計(jì)算活性:

        α-甘露糖苷酶活(U/g 質(zhì)量)= x×0.1÷W×F = 0.0063 U/g質(zhì)量

        相關(guān)系列產(chǎn)品

        BC0360/ BC0365 β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測(cè)試劑盒

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