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        • 乙酰乙酸含量檢測試劑盒 輔酶I
        產(chǎn)品名稱:

        乙酰乙酸含量檢測試劑盒 輔酶I

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-08
        乙酰乙酸含量檢測試劑盒 輔酶I
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        Acetoacetate(AcAc)Content Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5070
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途乙酰乙酸含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        乙酰乙酸(AcAc)含量檢測試劑盒(WST法)說明書

                                                    可見分光光度法

        貨號BC5070

        規(guī)格50T/24S

        產(chǎn)品內(nèi)容使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體70mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        顯色液

        液體4mL×1

        -20℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        -20℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前取一支加入1.5mL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復(fù)凍融。

        2、 試劑三:臨用前取一支加入400μL蒸餾水(約40T),充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存,可以保存2周。避免反復(fù)凍融。

        3、 標(biāo)準(zhǔn)品:8mg 乙酰乙酸鋰。臨用前加入950μL蒸餾水,充分溶解,即8mg/mL 乙酰乙酸鋰標(biāo)準(zhǔn)溶液。-20℃分裝保存4周。

        4、 工作液配制:臨用前根據(jù)試驗所需量將試劑一、試劑二、試劑三按照850:40:10(共900μL,1T的量)的比例配成工作液,充分混勻,置于37℃保溫15min此步驟不可省略),現(xiàn)用現(xiàn)配,工作液在4h內(nèi)用完。

        產(chǎn)品說明

        乙酰乙酸(AcAc)是酮體的重要成分之一,約占正常人酮體總量20%,是脂肪酸通過氧化產(chǎn)生的,是一種較強的有機酸。正常含量的乙酰乙酸對人體無害,糖尿病患者由于糖的利用降低,或饑餓時由于糖的代謝障礙,大量動用脂肪,乙酰乙酸的量都會積累。乙酰乙酸即可轉(zhuǎn)化成丙酮,也可以轉(zhuǎn)化成β-羥丁酸。

        在檢測中,乙酰乙酸通過偶聯(lián)酶反應(yīng)產(chǎn)生450nm吸收峰的產(chǎn)物,與存在的乙酰乙酸成比例。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品

        可見分光光度計、低溫離心機、超聲波細(xì)胞破碎儀、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、組織樣本的制備:按照質(zhì)量(g: 提取液體積(mL)1: 5~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,12000 g離心10 min,取上清,置冰上待測。

         

        2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);12000 g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        3、血清(漿):直接測定。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:將8mg/mL 乙酰乙酸鋰標(biāo)準(zhǔn)溶液,用蒸餾水稀釋0.25、0.2、0.150.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。

        3、 按下表步驟加樣:

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        樣本

        100

        100



        蒸餾水



        100


        標(biāo)準(zhǔn)溶液




        100

        工作液

        900


        900

        900

        試劑


        900



        37℃條件下反應(yīng)10 min

        顯色液

        50

        50

        50

        50

        37℃條件下避光反應(yīng)20 min

        450 nm處測定吸光度。分別記為A測定、A對照、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。ΔA測定=A空白-A測定-A對照),ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A空白-A標(biāo)準(zhǔn)??瞻坠苤恍枳?/span>1-2次。

        三、AcAc含量計算

        1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:以乙酰乙酸鋰標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)(xmg/mL),以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)(y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性回歸方程y=kx+b,將ΔA測定帶入方程求得xmg/mL)。

        2、 計算公式

        1)按照蛋白濃度計算

        AcAc含量(μmol/mg prot=x×V÷V×Cpr÷108.02×1000=9.258x÷Cpr

        2)按照樣本質(zhì)量計算

        AcAc含量(μmol/g 質(zhì)量)=x×V÷W×V÷V樣總)÷108.02×1000=9.258x÷W

        3)按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計算

        AcAc含量(μmol/104 cell=x×V÷細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總)÷108.02×1000=9.258x÷細(xì)胞數(shù)量

        4)按照血清(漿)體積計算

        AcAc含量(μmol/mL=x×V÷V÷108.02=9.258x

        V樣:反應(yīng)中加入樣本體積,100 μL=0.1 mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;細(xì)胞數(shù)量:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),104V樣總:加入提取液體積,1 mL108.02乙酰乙酸鋰分子量,mg/mmol

        注意事項:

        1、顯色完成后,請在15min之內(nèi)完成檢測。

        2、如果ΔA測定低于或超過線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。

        實驗實例

        1. 100μL 牛血清按上述步驟進(jìn)行實驗,用1mL玻璃比色皿測定后進(jìn)行計算ΔA測定=A空白-A測定-A對照)=1.101-1.129-0.063=0.035,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.299x+0.006,計算x=0.097。計算

        AcAc含量(μmol/mL=9.258x=0.898μmol/mL

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