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        • β-羥丁酸含量檢測試劑盒 輔酶
        產(chǎn)品名稱:

        β-羥丁酸含量檢測試劑盒 輔酶

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-08
        β-羥丁酸含量檢測試劑盒 輔酶
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        β-Hydroxybutyric acid (β-HB) Content Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5080
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途β-羥丁酸含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        β-羥丁酸(β-HB)含量檢測試劑盒(WST法)說明書

        可見分光光度法

        貨號(hào):BC5080

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體70mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        顯色液

        液體4mL×1

        -20℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前取一支加入1.5mL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復(fù)凍融。

        2、 試劑三:臨用前取一支加入400μL蒸餾水(約40T),充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存,可以保存2周。避免反復(fù)凍融。

        3、 標(biāo)準(zhǔn)品:8mg 3-羥基丁酸鈉。臨用前加入980μL蒸餾水,充分溶解,即8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。4℃保存1個(gè)月。

        4、 工作液配制:臨用前根據(jù)試驗(yàn)所需量將試劑一、試劑二、試劑三按照850:40:10(共900μL1T的量)的比例配成工作液,充分混勻,置于37℃保溫15min此步驟不可省略),現(xiàn)用現(xiàn)配,工作液在4h內(nèi)用完。

        產(chǎn)品說明:

        β-羥丁酸(β-HB),在嚴(yán)重酸中毒患者體內(nèi),由于酸中毒使患者體內(nèi)NADH生成增加,進(jìn)而促使β-羥丁酸與乙酰乙酸的比值自正常的2:1提高至16:1。β-羥丁酸在檢測糖尿病酮癥酸中毒診斷、治療中有重要意義,對(duì)糖尿病的早期診斷也有重要意義。本試劑盒適用于血清、血漿、尿液等樣本

        pH8.837℃條件下,β-HBβ-羥丁酸脫氫酶(HBDH)催化下脫氫生成乙酞乙酸,同時(shí)NAD+被還原成NADH;在1-mPMS作用下,WST-1可與NADH反應(yīng),產(chǎn)生水溶性formazan,在450nm下有特征吸收峰。通過檢測450nm下波長變化,可計(jì)算出β-HB的含量。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、 適用樣本

        血清、血漿、尿液等樣本,直接檢測即可,若溶液有渾濁可離心后進(jìn)行測定

        二、測定步驟

        1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:將8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,用蒸餾水稀釋至0.125、0.06250.03125、0.015625、0.0078125mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。

        3、 按下表步驟加樣:

        試劑名稱(μL

        測定管

        對(duì)照管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        樣本

        100

        100



        蒸餾水



        100


        標(biāo)準(zhǔn)溶液




        100

        工作液

        900


        900

        900

        試劑


        900



        37℃條件下反應(yīng)10 min

        顯色液

        50

        50

        50

        50

        37℃條件下避光反應(yīng)20 min

        450 nm處測定吸光度。分別記為A測定、A對(duì)照、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。ΔA測定=A測定-A對(duì)照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管只需做1-2次;標(biāo)準(zhǔn)曲線只需做1-2次。

        三、β-HB含量計(jì)算

        1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:以β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)(xmg/mL),以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)(y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性回歸方程y=kx+b,將ΔA測定帶入方程求得xmg/mL)。

        2、 計(jì)算公式

        1)按照蛋白濃度計(jì)算

        β-HB含量(μmol /mg prot=x×V÷V×Cpr÷126.09×1000=7.931x÷Cpr

        2)按照血清(漿)體積計(jì)算

        β-HB含量(μmol /mL=x×V÷V÷126.09×1000=7.931x

        V樣:反應(yīng)中加入樣本體積,100 μL=0.1 mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL126.09β-羥基丁酸鈉分子量,mg/mmol;10001mmol=1000μmol。

        注意事項(xiàng):

        1、顯色完成后,請(qǐng)?jiān)?/span>10 min之內(nèi)完成檢測。

        2、如果ΔA測定低于或超過標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光值范圍,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 100μL 牛血清按上述步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),用1mL玻璃比色皿測定后進(jìn)行計(jì)算ΔA測定=A測定-A對(duì)照=0.585- 0.057= 0.528帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.7905x+0.0221,x=0.640。計(jì)算

        β-HB含量(μmol /mL=7.931x=5.076 μmol /mL

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0710/BC0715  α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

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        β-羥丁酸含量檢測試劑盒 輔酶 β-羥丁酸含量檢測試劑盒 輔酶

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