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        • 超氧化物歧化酶活性檢測試劑盒 抗逆
        產(chǎn)品名稱:

        超氧化物歧化酶活性檢測試劑盒 抗逆

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-08
        超氧化物歧化酶活性檢測試劑盒 抗逆
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Superoxide Dismutase(SOD)Activity Assay Kit (WST-1 Method)
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5160
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途超氧化物歧化酶活性檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒(WST-1法)說明書

        可見分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC5160

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體30mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體40 μL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體11 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體0.3mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:使用前先使用掌上離心機離心至管底再吹打混勻;

        2、 試劑二工作液:根據(jù)樣本數(shù)量按試劑二:蒸餾水=5μL395μL(共400μL,約4S)的比例配制試劑二工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        3、 試劑四工作液:根據(jù)樣本量按試劑四蒸餾水=20μL180μL(共200μL,約4T)的比例配制試劑四工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        SODEC 1.15.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,催化超氧化物陰離子發(fā)生歧化作用,生成H2O2O2。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

        通過黃*呤及黃*呤氧化酶反應系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-),O2-可與WST-1反應生成水溶性黃色甲臜,后者在450nm處有吸收峰;SOD可清除O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應液黃色越深,說明SOD活性愈低,反之活性越高。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、電子天平、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

         

        1. 細菌或培養(yǎng)細胞樣本:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL=500-1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次),8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        2. 組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        3. 血清(漿)樣本:直接檢測。若有渾濁可離心后取上清進行測定。

        二、測定步驟

        1. 分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 測定前將試劑一、試劑三和試劑工作液37℃水浴5min以上。

        3. 樣本測定(在EP管中按順序加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        空白管1

        空白管2

        90

        90

        -

        -

        試劑一

        225

        225

        225

        225

        試劑二工作液

        100

        -

        100

        -

        試劑三

        175

        175

        175

        175

        蒸餾水

        360

        460

        450

        550

        試劑四工作液

        50

        50

        50

        50

        充分混勻,37水浴30min后,置于1mL玻璃比色皿測定450nm下的吸光度,分別記為A測定、A對照、A1空白、A2空白,計算ΔA測定=A測定-A對照,ΔA空白=A1空白-A2空白。(空白管1和空白管2各只需做1~2管,每個樣本有一個對照管)

        三、 SOD活性計算

        1、抑制百分率的計算:

        抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白× 100%

        盡量使樣本的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi),越靠近50%越準確。如果計算出來的抑制百分率小于30%或大于70%,則通常需要調(diào)整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需適當稀釋樣本;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準備濃度比較高的待測樣本或者提高加樣表中的樣本量,但需相應減少測定管和對照管中蒸餾水的體積。

        2SOD酶活性單位:在上述黃*呤氧化酶偶聯(lián)反應體系中抑制百分率為50%時,反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位。

        3、SOD酶活性計算:

        1)血清(漿)SOD活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總]÷V×F

        =11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F

        2)組織、細菌或培養(yǎng)細胞SOD活力計算:

        A. 按樣本蛋白濃度計算

        SOD活性 (U/mg prot)=[抑制百分率÷1-抑制百分率)×V反總V×Cpr×F

        =11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷Cpr×F

        B. 按樣本質(zhì)量計算

        SOD活性 (U/g 質(zhì)量)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V反總]÷(W×V÷V樣總)×F

        =11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F

        C. 按細菌或細胞數(shù)量計算

        SOD活力 (U/104 cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總]÷(N×V÷V樣總)×F

        =11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷N×F

        V反總:反應體系總體積,1mL;V樣:加入反應體系中樣本的體積,0.09mLV樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,gN:細胞或細菌總數(shù),104F:樣本稀釋倍數(shù)。

        注意事項:

        1、 樣本和試劑二工作液使用時在冰上放置。

        2、 樣本較多時,可按表格配制測定管工作液和對照管工作液(包含試劑一、(試劑二工作液)、試劑三、蒸餾水),試劑四工作液必須最后加入。

        實驗實例:

        1、 0.1016g大鼠肝臟加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清稀釋50倍,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.502-0.011=0.491,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.983-0.005=0.978,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=49.796%,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        SOD活性(U/g 質(zhì)量)=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F =5423.086 U/g 質(zhì)量。

        2、 0.1024g綠蘿葉片加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清稀釋3倍,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.490-0.105=0.385,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.983-0.005=0.978,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=60.634%,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        SOD活性(U/g 質(zhì)量)=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F =501.338 U/g 質(zhì)量。

        3、 450×104Hela細胞,加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.523-0.027=0.496,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.983-0.005=0.978抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=49.284%,按細胞數(shù)量計算酶活得:

        SOD活性(U/104 cell=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷N×F =0.024 U/104 cell。

        4、 225μL血清(相應減少蒸餾水用量)按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.855-0.158=0.697ΔA空白=A1空白-A2空白=0.983-0.005=0.978,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=28.732%,按血清(漿)體積計算酶活得:

        血清(漿)SOD活性(U/mL=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總]÷V×F=1.792 U/mL

        參考文獻:

        [1] Peskin A V, Winterbourn C C. A microtiter plate assay for superoxide dismutase using a water-soluble tetrazolium salt (WST-1) [J]. Clinica chimica acta, 2000, 293(1-2):157-166.

        [2] Hou Z, Zhao L, Wang Y, et al. Purification and characterization of superoxide dismutases from sea buckthorn and chestnut rose[J]. Journal of food science, 2019, 84(4): 746-753.

        相關系列產(chǎn)品:

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        超氧化物歧化酶活性檢測試劑盒 抗逆 超氧化物歧化酶活性檢測試劑盒 抗逆

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