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        • 超氧化物歧化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        超氧化物歧化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-08
        超氧化物歧化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Superoxide Dismutase(SOD)Activity Assay Kit (WST-1 Method)
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5160
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途超氧化物歧化酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒(WST-1法)說(shuō)明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。

        貨號(hào):BC5165

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體 60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體5 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體25 μL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體4 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體0.12 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:使用前先使用掌上離心機(jī)離心至管底再吹打混勻;

        2、 試劑二工作液:根據(jù)樣本數(shù)量按試劑二:蒸餾水=5μL245μL(共250μL,約12S)的比例配制試劑二工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        3、 試劑四工作液:根據(jù)樣本量按試劑四蒸餾水=20μL180μL(共200μL,約20T)的比例配制試劑四工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        SODEC 1.15.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化超氧化物陰離子發(fā)生化作用,生成H2O2O2。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

        通過(guò)黃*呤及黃*呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)O2-可與WST-1反應(yīng)生成水溶性黃色甲臜,后者在450nm處有吸收峰;SOD可清除O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應(yīng)液黃色越深,說(shuō)明SOD活性愈低,反之活性越高。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、電子天平、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣本:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL=500-1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液)超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

        2. 組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

        3. 血清(漿)樣本:直接檢測(cè),若有渾濁可離心后取上清進(jìn)行測(cè)定。

        二、測(cè)定步驟

        1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2. 測(cè)定前將試劑一、試劑三和試劑四工作液37℃水浴5min以上。

        3. 加樣表(按順序在EP管或96孔板中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測(cè)定管

        對(duì)照管

        空白管1

        空白管2

        20

        20

        -

        -

        試劑一

        45

        45

        45

        45

        試劑二工作液

        20

        -

        20

        -

        試劑三

        35

        35

        35

        35

        蒸餾水

        70

        90

        90

        110

        試劑四工作液

        10

        10

        10

        10

        充分混勻,37℃水浴30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A。分別記為A測(cè)定、A對(duì)照、A1空白、A2空白,計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照,ΔA空白=A1空白-A2空白。(空白管1和空白管2各只需做1~2管;每個(gè)樣本有一個(gè)對(duì)照管)

        三、SOD活性計(jì)算

        1、抑制百分率的計(jì)算

        抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測(cè)定) ÷ΔA空白×100%

        盡量使樣本的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi),越靠近50%越準(zhǔn)確。如果計(jì)算出來(lái)的抑制百分率小于30%或大于70%,則通常需要調(diào)整加樣量后重新測(cè)定。如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏高,則需適當(dāng)稀釋樣本;如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏低,則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測(cè)樣本或者提高加樣表中的樣本量,但需相應(yīng)減少測(cè)定管和對(duì)照管中蒸餾水的體積。

        2、SOD酶活性單位:在上述黃*呤氧化酶偶聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50%時(shí),反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位。

        3SOD酶活性計(jì)算:

        1)血清(漿)SOD活性(U/mL=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷V×F

        =10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×F

        2)組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞SOD活力計(jì)算:

        a.按樣本蛋白濃度計(jì)算

        SOD活性(U/mg prot=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷(V×Cpr)×F

        =10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷Cpr×F

        b.按樣本質(zhì)量計(jì)算

        SOD活性(U/g 質(zhì)量)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷(W×V÷V樣總)×F

        =10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F

        c.按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        SOD 活力(U/104 cell=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷(N×V÷V樣總)×F

        =10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷N×F

        V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:加入反應(yīng)體系中的樣本體積,0.02mLV樣總:加入提取液體積1mL;Cpr:蛋白樣本濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,gN:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),以104計(jì);F:樣本稀釋倍數(shù)。

        注意事項(xiàng):

        1、 樣本和試劑二工作液使用時(shí)在冰上放置。

        2、 樣本較多時(shí),可按表格配制測(cè)定管工作液和對(duì)照管工作液(包含試劑一、(試劑二工作液)、試劑三、蒸餾水),試劑四工作液必須最后加入。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g大鼠肝臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清稀釋50倍,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定-A對(duì)照=0.419-0.047=0.372,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.752-0.045=0.707,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測(cè)定) ÷ΔA空白×100%=47.38%,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        SOD活性(U/g 質(zhì)量)=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F =4502.09 U/g 質(zhì)量。

        2、 0.1g綠蘿葉片加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清稀釋3倍,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定-A對(duì)照=0.417-0.108=0.309,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.752-0.045=0.707,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測(cè)定) ÷ΔA空白×100%=56.29%,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        SOD活性(U/g 質(zhì)量)=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F =386.34 U/g 質(zhì)量。

        3、 450×104個(gè)Hela細(xì)胞,加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定-A對(duì)照=0.417-0.053=0.364,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.752-0.045=0.707,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測(cè)定) ÷ΔA空白×100%=48.51%,按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算酶活得:

        SOD活性(U/104 cell=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷N×F =0.021 U/104 cell。

        4、 50μL人血清按照測(cè)定步驟操作(同時(shí)減少加樣表中蒸餾水體積),用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定-A對(duì)照=0.889-0.418=0.471,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.752-0.045=0.707抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測(cè)定) ÷ΔA空白×100%=33.38%,按血清(漿)體積計(jì)算酶活得:

        血清(漿)SOD活性(U/mL=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷V×F =2.004 U/mL

        參考文獻(xiàn):

        [1] Peskin A V, Winterbourn C C. A microtiter plate assay for superoxide dismutase using a water-soluble tetrazolium salt (WST-1) [J]. Clinica chimica acta, 2000, 293(1-2):157-166.

        [2] Hou Z, Zhao L, Wang Y, et al. Purification and characterization of superoxide dismutases from sea buckthorn and chestnut rose[J]. Journal of food science, 2019, 84(4): 746-753.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0190/BC0195  多酚氧化酶(PPO)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0210/BC0215  苯丙*酸解氨酶(PAL)活性檢測(cè)試劑盒

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        超氧化物歧化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 超氧化物歧化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

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