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        • 木質(zhì)素過氧化物酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        木質(zhì)素過氧化物酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-08
        木質(zhì)素過氧化物酶活性檢測試劑盒 微量法
        儲存條件
        2-8℃
        有效期
        6個月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
        英文名稱
        Lignin peroxidase (Lip) Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC1615
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途木質(zhì)素過氧化物酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        木質(zhì)素過氧化物酶(Lip)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號:BC1615

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體115mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑二

        液體5mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑三

        液體3mL×1瓶

        2-8℃保存

        產(chǎn)品說明:

        木質(zhì)素過氧化物酶(EC1.11.1.14)(Lip)是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,是木質(zhì)素的生物降解過程中的主要木質(zhì)素降解酶類。Lip在飼料資源開發(fā)以及廢水、廢物處理領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。

        藜蘆醇可以被Lip催化發(fā)生氧化反應(yīng),其產(chǎn)物藜蘆醛在310nm處有最大吸收峰,以藜蘆醇為反應(yīng)底物,通過測定310nm處藜蘆醛的吸光值,可以判定Lip的酶活性。

        注意:實(shí)驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、超聲波細(xì)胞破碎儀、研缽/勻漿器、微量石英比色皿/96孔(UV板)、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、組織:按照樣本質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿;10000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        2、細(xì)菌或細(xì)胞樣本:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一)加入試劑一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率300W,超聲 3s,間隔 7s,總時間3min),10000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        3、培養(yǎng)液或其他液體:直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測定。

        二、測定步驟

        1、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至310nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、測定前根據(jù)實(shí)驗用量取出部分試劑一、試劑二、試劑三置于37℃預(yù)熱10min以上。若一次性測定樣本過多,可根據(jù)使用量將試劑一、二、三按6:2:1比例配成工作液后進(jìn)行預(yù)熱,測定時按照20μL樣本+180μL工作液加入微量石英比色皿/96孔(UV板)進(jìn)行測定。

        3、加樣表(在微量石英比色皿/96孔(UV板)中依次加入下列試劑)

         

        試劑名稱(μL

        測定管

        試劑一(μL

        120

        試劑二(μL

        40

        樣本(μL

        20

        試劑三(μL

        20

             將上述試劑分別加入微量石英比色皿/96孔(UV板)后迅速吹打混勻,從加完最后一個試劑開始計時,記錄第15s的吸光值A1,將混合液置于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5min(培養(yǎng)箱有控溫功能的可以將溫度調(diào)至37℃),取出測定5min15s時的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1,注意保證測定時間的準(zhǔn)確性。

        三、Lip活力的計算

        A.用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

        1.按樣本蛋白質(zhì)濃度計算

        酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

        Lip活性(U/mg prot= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V×Cpr)÷T=215.05×ΔA÷Cpr

        2.按樣本質(zhì)量計算

        酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每g組織每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

        Lip活性(U/g 質(zhì)量)= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×W)÷T=215.05×ΔA÷W

        3.按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計算

        酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每104細(xì)菌/細(xì)胞每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

        Lip活性(U/104 cell= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T=215.05×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

        4. 按照樣本體積計算

        酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每mL血清或液體樣本每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需酶量為一個酶活單位。

        Lip活性(U/mL=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T=215.05×ΔA

        ε:藜蘆醛摩爾消光系數(shù):9300L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,2×10-4L;V樣:加入樣本體積,0.02mL,V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,5 min;109:單位換算系數(shù),1mol=109nmol。

        B.96UV板測定的計算公式如下:

        1. 按樣本蛋白質(zhì)濃度計算

        酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

        Lip活性(U/mg prot= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V×Cpr)÷T=358.42×ΔA÷Cpr

        2. 按樣本質(zhì)量計算

        酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每g組織每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

        Lip活性(U/g 質(zhì)量)= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×W)÷T=358.42×ΔA÷W

        3. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計算

        酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每104細(xì)菌/細(xì)胞每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

        Lip活性(U/104 cell)= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T=358.42×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

        4. 按照樣本體積計算

        酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每mL血清或液體樣本每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需酶量為一個酶活單位。

        Lip活性(U/mL)=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T=358.42×ΔA

         

        ε:藜蘆醛摩爾消光系數(shù):9300L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.6cm;V反總:反應(yīng)總體積,2×10-4L;V樣:加入樣本體積,0.02mLV樣總:提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,5 min;109:單位換算系數(shù),1mol=109nmol。

        實(shí)驗實(shí)例:

        取0.1125g杏鮑菇加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清置冰上,之后按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計算A1=0.2294,A2=0.5322,ΔA=A2-A1=0.3028,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        Lip 活性(U/g 質(zhì)量)=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T=142.09 U/g 質(zhì)量。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Konadu K T, Harrison S, Osseo-Asare K, et al. Transformation of the carbonaceous matter in double refractory gold ore by crude lignin peroxidase released from the white-rot fungus[J]. International Biodeterioration & Biodegradation, 2019, 143(1996):104735.

        [2] Ahmed A A Q, Mckay T J M. Potential of Bacillus sp. LG7 as a Promising Source of Ligninolytic Enzymes for Industrial and Biotechnological Applications[J]. Proceedings of the National Academy of ences India, 2017.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC1630/BC1635  漆酶活性檢測試劑盒

        BC1620/BC1625  錳過氧化物酶(Mnp)活性檢測試劑盒

         

        木質(zhì)素過氧化物酶活性檢測試劑盒 微量法 木質(zhì)素過氧化物酶活性檢測試劑盒 微量法

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