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        • 磷脂酶D(PLD)檢測試劑盒 脂肪酸代謝
        產品名稱:

        磷脂酶D(PLD)檢測試劑盒 脂肪酸代謝

        產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-07-08
        磷脂酶D(PLD)檢測試劑盒 脂肪酸代謝
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        Phospholipase D(PLD)Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S
        自備試劑
        該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網站說明書

        產品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2410
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途磷脂酶D(PLD)檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合

        磷脂酶DPLD)活性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC2410

        規(guī)格:50T/48S

        產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體0.6mL×1

        -20℃保存

        試劑一

        液體70 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體10mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑四

        液體45 mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1.提取液二:試劑易揮發(fā),用完后快速擰蓋,封口纏口;

        2.試劑三:試劑放于試劑瓶內玻璃管中。臨用前取一支加入3mL乙醇充分溶解后取上清使用;2-8℃可以分裝保存2周,避免反復凍融;

        3.標準品:50umol/mL 膽*溶液,臨用前用試劑一稀釋100500nmol/mL標準溶液備用(可以取10μL 50umol/mL 膽*溶液加入990μL試劑一混勻即500nmol/mL標準溶液 )。

        產品說明:

        磷脂酶DPhospholipases D,PLD)催化水解磷脂酰膽*末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和膽*,膽*在膽*氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫,過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基安*比林和重蒸酚氧化成粉紅色物質,在500nm處有特征吸收峰。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、水浴鍋、超速冷凍離心機、可調式移液槍、天平、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、蒸餾水、無水乙醇和冰。

        操作步驟:一、樣本處理可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻

         

        1、 組織:按照質量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例加入提取液,建議稱取約0.1g樣本,加入0.99mL提取液一和0.01mL提取液二,冰浴勻漿后于4℃10 000g離心5min;取全部上清于4℃、100 000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

        2、 細胞:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入0.99mL提取液一和0.01mL提取液二),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后于4℃10 000g離心5min;取全部上清于4℃、100 000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

        3、 血清(漿):直接測定。

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計預熱30min 以上,調節(jié)波長到500nm,蒸餾水調零。

        2、 樣本測定:

        試劑名稱 (μL)

        空白管

        標準管

        測定管

        試劑一

        100

        -

        -

        試劑二

        150

        150

        150

        標準品

        -

        100

        -

         

        -

        -

        100

        試劑三

        100

        100

        100

        充分混勻,30℃反應30min,沸水浴10min,打開蓋子,自然冷卻5min。

        試劑四

        700

        700

        700

        30℃反應30min,測定500nm處吸光值,分別記為A空白管、A標準管和A測定管。計算ΔA標準=
        A標準管-A空白管,ΔA測定=A測定管-A空白管??瞻坠芎蜆藴使苤恍枳?/span>1-2次。

        三、酶活計算

        1、 按蛋白濃度計算

        酶活定義:每毫克蛋白每分鐘水解磷脂酰膽*產生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位。

        PLD活性 (U/mg prot) =ΔA測定÷ΔA標準×C標準×V提取÷(Cpr×V提取)÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

        2、 按樣本質量計算

        酶活定義:每克組織每分鐘水解磷脂酰膽*產生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位

        PLD活性 (U/g 質量) = ΔA測定÷ΔA標準×C標準×V提取÷W÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標準÷W

        3、 按細菌或細胞數(shù)量計算

        酶活定義:104個細胞每分鐘水解磷脂酰膽*產生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位。

        PLD活性(U/104 cell= ΔA測定÷ΔA標準×C標準×V提取÷細胞數(shù)量÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標準÷細胞數(shù)量

        4、 按血清(漿)計算:

        酶活定義:每毫升血清每分鐘水解磷脂酰膽*產生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位。

        PLD活性(U/mL= ΔA測定÷ΔA標準×C標準×V血清(漿)÷V血清(漿)÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標準

        C標準:標準液濃度,500nmol/mLV提?。杭尤氲奶崛∫后w積(提取液一+提取液二)1mL;V血清(漿):血(漿)體積,0.1mLW:樣本質量,g;細胞數(shù)量:以萬計;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mLT:反應時間,30min

        注意事項:

        1. 顯色完成后,若有沉淀,于8000g,25℃離心5min后取上清測定。

        2. 吸光值不宜超過1,否則用試劑一將酶液進行稀釋,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        相關系列產品:

        BC2420/BC2425   磷脂酶CPLC)活性檢測試劑盒

        BC2430/BC2435   磷脂酶A2PLA2)活性檢測試劑盒

         

         磷脂酶D(PLD)檢測試劑盒 脂肪酸代謝 磷脂酶D(PLD)檢測試劑盒 脂肪酸代謝


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