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        • 果糖激酶(FRK)活性檢測試劑盒 糖代謝
        產(chǎn)品名稱:

        果糖激酶(FRK)活性檢測試劑盒 糖代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-09
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        果糖激酶(FRK)活性檢測試劑盒 糖代謝
        單位

        英文名稱
        Fructokinase(FRK) Activity Assay Kit
        檢測方法
        紫外分光光度法
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5920
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途果糖激酶(FRK)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        果糖激酶(FRK)活性檢測試劑盒說明書

        紫外分光光度法

        貨號:BC5920

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        粉劑一

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體30 mL×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體×3

        -20℃保存

        試劑六

        粉劑×3

        -20℃保存

        溶液的配制:

        1. 提取液:臨用前將粉劑一溶于提取液中;該試劑為懸濁液,使用前搖勻即可,2-8℃保存12周;

        2. 試劑一:試劑放于試劑瓶內(nèi)玻璃管中。臨用前加入6mL蒸餾水,充分溶解,溶解后的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        3. 試劑二:試劑放于試劑瓶內(nèi)玻璃管中。臨用前加入6mL蒸餾水,充分溶解,溶解后的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        4. 試劑三:試劑放于試劑瓶內(nèi)玻璃瓶中,臨用前加入6mL蒸餾水溶解,溶解后的試劑2-8℃分裝保存4周;

        5. 試劑五工作液:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑五:蒸餾水=8μL: 1000μL(共1008μL,約20T)的比例配制,充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用;

        6. 試劑六:臨用前取一支試劑六加入1mL蒸餾水,充分溶解。溶解后的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融。(該試劑為凍干試劑,可能存在不同瓶間肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象,此現(xiàn)象不影響使用,實(shí)際質(zhì)量相同)

        產(chǎn)品說明:

        果糖激酶(Fructokinase,FRK,EC 2.7.1.4)是催化果糖磷酸化的主要酶。果糖激酶可以作為植物的己糖感受器和信號分子,通過影響植物的生長周期來調(diào)控植物的代謝和生長發(fā)育進(jìn)程,果糖磷酸化對于維持淀粉生物合成方向具有重要意義。

        FRK催化果糖合成6-磷酸果糖,6-磷酸果糖在磷酸己糖異構(gòu)酶的作用下異構(gòu)為6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADHNADH340nm有特征吸收峰。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計、低溫離心機(jī)、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿

        /細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織樣本:按樣本質(zhì)量(g: 提取液體積(mL=1 : 5~10比例加入提取液(建議稱取0.1g樣本,加入1.0mL提取液),冰浴勻漿后,于4℃8000g,離心10min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

        2. 細(xì)胞樣本:按細(xì)胞數(shù)量(106):提取液體積(mL=5~10 : 1的比例加入提取液(建議5百萬細(xì)胞加入1.0mL提取液),冰浴超聲破碎細(xì)胞(功率200W,超聲3s,間隔7s,總時間3min),然后于4℃,8000g,離心10min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

        3. 液體樣本:直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。

        二、 測定步驟

        1.紫外分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2.試劑四37℃預(yù)熱15min

        3.1mL石英比色皿按下表順序加樣:

        試劑名稱(μL

        測定管

        空白管

        試劑一

        100

        100

        試劑二

        100

        100

        試劑三

        100

        100

        試劑四

        500

        500

        試劑五工作液

        50

        50

        試劑六

        50

        50

        蒸餾水

        -

        100

        樣本

        100

        -

        立即充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于37℃水浴鍋或者恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)5min,拿出迅速擦干測定5min10s時的吸光值A2,記錄340nm10s時吸光值 A1 5min 后的吸光值 A2。計算ΔA測定=A2測定-A1測定,ΔA空白=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測定-ΔA空白??瞻字恍枳?/span>1-2次。

        注:若樣本數(shù)量較多,可將試劑一、二、三、四、五工作液、六按比例配成工作液使用。

        三、FRK活性計算

        1. 按樣本蛋白濃度計算

        單位的定義:在37℃溫度下每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmolNADH定義為一個酶活單位。

        FRK活性(U/mg prot=ΔA÷(ε×d)×V反總×109÷(Cpr×V) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

        2. 按樣本質(zhì)量計算

        單位的定義:在37℃溫度下每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmolNADH定義為一個酶活單位。

        FRK活性(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷(ε×d)×V反總×109÷(W÷V提取×V) ÷T =321.54×ΔA÷W

        3. 按細(xì)胞數(shù)目計算

        單位的定義:在37℃溫度下每106個細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmolNADH定義為一個酶活單位。

        FRK活性(U/106 cell=ΔA÷(ε×d)×V反總×109÷(N÷V提取×V) ÷T =321.54×ΔA÷N

        4. 按液體體積計算

        單位的定義:在37℃溫度下每毫升每分鐘催化產(chǎn)生1 nmolNADH定義為一個酶活單位。

        FRK活性(U/mL=ΔA÷(ε×d)×V反總×109÷V÷T =321.54×ΔA

        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d1mL石英比色皿光徑,1cmV反總:反應(yīng)總體積,1×10-3L109:單位換算,1mol=109nmolV樣:加入樣本體積,0.1mL;V提?。禾崛∫后w積,1mL; Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;N:細(xì)胞數(shù)目,以106計;T:反應(yīng)時間,5min

        注意事項:

        1. 如果?A小于0.005,可以增加樣本量或延長反應(yīng)時間再進(jìn)行測定;如果?A測定大于0.6A1測定小于A1空白,建議將樣本稀釋或者縮短反應(yīng)時間再進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 0.1023g土豆組織樣本,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用1mL石英比色皿測得計算:ΔA測定=A2測定-A1測定=0.165-0.092=0.073,ΔA空白=A2空白-A1空白=0.013-0.012=0.001ΔA=ΔA測定- ΔA空白=0.072。按樣本質(zhì)量計算得:

        FRK活性(U/g 質(zhì)量)=321.54×ΔA÷W = 226.304 U/g 質(zhì)量。

        2. 0.06g酵母粉,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用1mL石英比色皿測得計算:ΔA測定=A2測定-A1測定=0.737-0.237=0.5ΔA空白=A2空白-A1空白=0.013-0.012=0.001,ΔA=ΔA測定- ΔA空白=0.499。按樣本質(zhì)量計算得:

        FRK活性(U/g 質(zhì)量)=321.54×ΔA÷W =2674.141 U/g 質(zhì)量。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Giroix M H, Jijakli H, Courtois P, et al. Fructokinase activity in rat liver, ileum, parotid gland, pancreas, pancreatic islet, B and non-B islet cell homogenates.[J].International Journal of Molecular Medicine, 2006, 17(3):517-522.

        [2] Kurt, Bergbauer, Ralf, et al. Studies on Fructose Metabolism in Cultured Astroglial Cells and Control Hepatocytes: Lack of Fructokinase Activity and Imrrunoreactivity in Astrocytes[J].Developmental Neuroscience, 2009, 18(5-6):371-379.

        [3] Schaffer A A, Petreikov M. Inhibition of fructokinase and sucrose synthase by cytosolic levels of fructose in young tomato fruit undergoing transient starch synthesis[J].Physiologia Plantarum, 2010, 101(4):800-806.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0740/BC0745  己糖激酶(HK)活性檢測試劑盒

        BC0530/BC0535  磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒

        BC2190/BC2195  磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性檢測試劑

        BC2450/BC2455  植物組織果糖(FT)含量檢測試劑盒

        果糖激酶(FRK)活性檢測試劑盒 糖代謝 果糖激酶(FRK)活性檢測試劑盒 糖代謝

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