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        • 果膠裂解酶活性檢測試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        果膠裂解酶活性檢測試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-09
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        果膠裂解酶活性檢測試劑盒
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Pectin Lyase(PL)Activity Assay Kit
        檢測方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2640
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途果膠裂解酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        果膠裂解酶(PL)活性檢測試劑盒說明書
        紫外分光光度法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
        貨號: BC2640
        規(guī)格: 50T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體60 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一粉劑×12-8℃保存
        試劑二液體50 mL×1瓶2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 工作液:將試劑一倒入試劑二于50水浴中溶解(期間可拿出振蕩數(shù)次)。該試劑易長菌,配制完成后可-20℃分裝保存,可保存12周。

        產(chǎn)品說明:
        果膠裂解酶(EC4.2.2.10)是果膠酶的重要組成部分,催化果膠分子鏈的消除裂解。來源比較廣泛,主要來源于微生物,在食品加工工業(yè)中提高果汁產(chǎn)量方面有重要意義,在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面也具有潛在的應(yīng)用價值。果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵,生成在還原端C4C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸,在235nm處有特征吸收峰,測定235nm下吸光度的上升來表示果膠裂解酶的活性。
        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計、臺式離心機、恒溫水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        2. 細(xì)胞、細(xì)菌真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g4℃離心10min,取上清置于冰上待測。(細(xì)菌、真菌等難以數(shù)量計算的微生物也可以稱取0.1g 細(xì)菌/真菌沉淀來進(jìn)行前處理)

        3. 培養(yǎng)液:直接測定。

        二、測定步驟

        1. 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至235nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 操作表:(在1.5mL離心管中)

        試劑名稱測定管空白管
        工作液(μL900 900
        樣本μL100-
        蒸餾水(μL-100
        充分混勻同時按下計時器,測定10s235nm下的初始值A1,40反應(yīng)30min后再次測定吸光值A2,計算ΔA測定管=A2測定管-A1測定管,ΔA空白管= A2空白管-A1空白管,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。空白管只需做1-2次。

        三、果膠裂解酶活性計算

        1. 按照蛋白濃度計算

        酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
        PL活性(U/mg prot=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×Cpr÷T=64.1×ΔA÷Cpr

        1. 按照樣本質(zhì)量計算

        酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
        PL活性(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×W÷V樣總)÷T= 64.1×ΔA÷W

        1. 按照細(xì)菌、真菌貨細(xì)胞數(shù)量計算

        酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每104個細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
        PL活性(U/104 cell)= ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×N÷V樣總)÷T= 64.1×ΔN

        1. 按照培養(yǎng)液體積計算

        酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
        PL活性(U/mL=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V÷T= 64.1×ΔA
        ε:不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù),5200 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.001L;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,30min;109:換算系數(shù),1mol=109nmol;N:細(xì)胞數(shù)量,以萬計。
        注意事項:

        1. 若A1測定管大于1.5或者ΔA大于0.5,將樣本粗酶液用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測定。

        2. 建議一次測定不要測定過多樣本以免耽誤過多的酶促反應(yīng)時間。

        3. 空白管正常情況下變化不超過0.02。

        實驗實例:

        1. 取0.1g香蕉皮加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。之后按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定管= A2測定-A1測定=0.43-0.421=0.009,ΔA空白管= A2空白管-A1空白管=0.217-0.217=0,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        PL活性(U/g 質(zhì)量)= 64.1×ΔA÷W=5.526 U/g 質(zhì)量。

        1. 0.1g大腸桿菌沉淀加入1mL提取液冰浴超聲波破碎細(xì)胞,然后10000g,4℃離心10min,取上清置于冰上,之后按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=1.352-0.923=0.429,ΔA空白管= A2空白管-A1空白管=0.217-0.217=0,按照樣本質(zhì)量計算酶活得:

        PL活性(U/g 質(zhì)量)= 64.1×ΔA÷W=274.99 U/g 質(zhì)量。
        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC2630/BC2635 果膠酶活性檢測試劑盒
        BC3680/BC3685 原果膠含量檢測試劑盒
        BC4150/BC4155 離子結(jié)合型果膠(ISP)含量檢測試劑盒

        果膠裂解酶活性檢測試劑盒 果膠裂解酶活性檢測試劑盒

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