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        • 果膠酶活性檢測(cè)試劑盒 糖代謝
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        • 果膠酶活性檢測(cè)試劑盒 糖代謝
        產(chǎn)品名稱:

        果膠酶活性檢測(cè)試劑盒 糖代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-09
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        中文名稱
        果膠酶活性檢測(cè)試劑盒 糖代謝
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Pectinase Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC2630
        規(guī)格50管/24樣供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途果膠酶測(cè)試應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        果膠酶活性檢測(cè)試劑盒說明書

        可見分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號(hào):BC2630

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體40 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一A

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑一B

        液體40 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體40 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:將試劑一A倒入試劑一B50℃水浴中溶解(期間可拿出振蕩數(shù)次)。該試劑易長(zhǎng)菌,配制完成后可-20℃分裝保存,可保存12周。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:10mg半乳糖醛酸。臨用前加入0.943mL蒸餾水,配成50μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

        產(chǎn)品說明:

        果膠酶(pectinase)是分解果膠的酶類,包括原果膠酶,果膠酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類,廣泛存在于高等植物果實(shí)和微生物中,是水果加工中最重要的酶。

        果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸與DNS試劑反應(yīng)生成在540nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì),測(cè)定540nm處吸光值變化可計(jì)算得果膠酶活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

        2、菌類:按照細(xì)菌數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)菌(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

        3、液體:直接檢測(cè)。

        二、測(cè)定步驟

        1、 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,蒸餾水調(diào)零。

         

        2、 50μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為6、5、4、3、2、1 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

        3、 125μL樣本沸水浴10min備用。

        4、 樣本測(cè)定(在1.5mL離心管中):

        試劑名稱

        對(duì)照管

        測(cè)定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        試劑一(µL

        500

        500

        500

        500

        50℃水浴溫育5min

        標(biāo)準(zhǔn)溶液(µL

        -

        -

        125

        -

        樣本(µL

        -

        125

        -

        -

        蒸餾水(µL

        -

        -

        -

        125

        煮沸樣本(µL

        125

        -

        -

        -

        混勻,50℃水浴反應(yīng)30min,馬上沸水浴5min,冷卻后8000g,常溫離心10min,取上清。

        上清液(µL

        500

        500

        500

        500

        試劑二(µL

        500

        500

        500

        500

        沸水浴5min,冰浴冷卻終止反應(yīng),測(cè)定540nm處吸光值A,計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

        三、果膠酶活性計(jì)算

        1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b,將ΔA帶入方程得到xμmol/mL)。

        2、 果膠酶活性的計(jì)算:

        1)按蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:在50℃,pH3.5條件下,每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1μmol半乳糖醛酸為1個(gè)酶活力單位。

        果膠酶活性(U/mg prot=x×V提取÷V提取×Cpr÷T= 2x÷Cpr

        2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:在50℃,pH3.5條件下,每克樣本每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1μmol半乳糖醛酸為1個(gè)酶活力單位。

        果膠酶活性(U/g 質(zhì)量)= x×V提取÷W÷T=2x÷W

        3)按照細(xì)菌數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:在50℃,pH3.5條件下,每104個(gè)細(xì)菌每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1μmol半乳糖醛酸為1個(gè)酶活力單位。

        果膠酶活性(U/104 cell= x×V提取÷T÷細(xì)菌數(shù)量(萬(wàn)個(gè))=2x÷細(xì)菌數(shù)量(萬(wàn)個(gè))

        4)按液體體積計(jì)算

        酶活定義:在50℃,pH3.5條件下,每mL樣本每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1μmol半乳糖醛酸為1個(gè)酶活力單位。

        果膠酶活性(U/mL= x×V÷V÷T= 2x

        V提?。禾崛∫后w積,1mLV樣:加入的樣本體積,0.125mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間:0.5h。

        注意事項(xiàng):

        1、 A大于1.5時(shí),建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

        2、 植物果實(shí)組織建議將樣本稀釋10倍或20倍后再測(cè)定。

         

         

         

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 0.1g獼猴桃加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上稀釋10倍后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算ΔA= A測(cè)定管-A對(duì)照管=1.465-1.45=0.015,依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.2575x-0.2214,計(jì)

        算得x=0.918μmol/mL,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        果膠酶活性(U/g質(zhì)量)=2x÷W×10(稀釋倍數(shù))= 183.6 U/g質(zhì)量。

        相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):

        [1] Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali. Microbial Pathogenesis. October 2018;132-138.(IF2.581)

        [2] Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Two members of the velvet family,VmVeA and VmVelB,affect conidiation,virulence and pectinase expression in Valsa mali. Molecular Plant Pathology. November 2017;(IF4.379)

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC3680/BC3685 原果膠含量檢測(cè)試劑盒

        BC4120/BC4125 可溶性果膠含量檢測(cè)試劑盒

        BC4150/BC4155 離子結(jié)合型果膠(ISP)含量檢測(cè)試劑盒 

        BC2640/BC2645 果膠裂解酶(PL)活性檢測(cè)試劑盒

        果膠酶活性檢測(cè)試劑盒 糖代謝 果膠酶活性檢測(cè)試劑盒 糖代謝

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