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        您的位置: 網(wǎng)站首頁 > 產(chǎn)品中心 > > 生化檢測試劑盒-常量法 > BC1540-50T/24S亞硝酸還原酶(NiR)活性檢測試劑盒 常量法
        • 亞硝酸還原酶(NiR)活性檢測試劑盒 常量法
        產(chǎn)品名稱:

        亞硝酸還原酶(NiR)活性檢測試劑盒 常量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-09
        亞硝酸還原酶(NiR)活性檢測試劑盒 常量法
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Nitrite Reductase (NiR) Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC1540
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途亞硝酸還原酶(NiR)活性檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        亞硝酸還原酶(NiR)活性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC1540

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體30mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體8mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體25mL×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體25mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入6mL蒸餾水充分溶解,2-8℃保存2周;

        2、 試劑三:臨用前加入15mL蒸餾水,可70-80℃加熱溶解;2-8℃保存3個月。

        3、 試劑五:若出現(xiàn)沉淀,可70-80℃加熱溶解;

        4、 標準品:10µmol/mL亞硝 *標準溶液; 

        5、 工作液:臨用前根據(jù)樣本量將試劑四和試劑五按1:1的比例混合,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        亞硝酸還原酶(Nitrite reductase,NiR是亞硝態(tài)氮還原過程中的關鍵酶,在自然界氮素循環(huán)過程中發(fā)揮著重要作用,其廣泛存在于微生物及植物體內(nèi),能夠催化亞硝酸鹽還原,減少亞硝態(tài)氮在環(huán)境中的積累,降低其對生物體生長發(fā)育的毒害作用。

        亞硝酸還原酶可將NO2-還原為NO,使樣本中參與重氮化反應生成紫紅色化合物的NO2-減少,即540nm處吸光值的變化可反應樣本中亞硝酸還原酶的活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、天平、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 組織:按樣本質量(g: 提取液體積(mL1 : 5~10比例(建議稱取0.1g樣本,加入1.0mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后,于4 ℃,10000g,離心10min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

         

        2. 細菌或細胞:按細胞數(shù)量(104):提取液體積(mL500~1000 : 1的比例(建議500萬細胞加入1.0mL提取液)加入提取液,冰浴超聲破碎細胞(功率200w,超聲3s,間隔7s,總時間3min),然后于4℃,10000g,離心10min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計預熱30min 以上,調節(jié)波長至540nm,蒸餾水調零。

        2、 標準液的稀釋:10µmol/mL的標準溶液用蒸餾水稀釋至0.08、0.06、0.05、0.025、0.0125、0.006250.003125、0.0015625µmol/mL標準溶液待測。

        3、 標準液稀釋可參考下表:

        序號

        稀釋前濃度(µmol/mL

        標準液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(µmol/mL

        1

        10

        30

        270

        1

        2

        1

        80

        920

        0.08

        3

        1

        60

        940

        0.06

        4

        1

        50

        950

        0.05

        5

        0.05

        500

        500

        0.025

        6

        0.025

        500

        500

        0.0125

        7

        0.0125

        500

        500

        0.00625

        8

        0.00625

        500

        500

        0.003125

        9

        0.003125

        500

        500

        0.0015625

        備注:實驗中每個標準管需350µL標準溶液。

        4、 樣本測定:

        試劑名稱(μL

        基質管

        對照管

        測定管

        標準管

        空白管

        樣本

        -

        100

        100

        -

        -

        蒸餾水

        100

        200

        -

        -

        -

        試劑一

        200

        -

        200

        -

        -

        試劑二

        200

        200

        200

        -

        -


        混勻后,25℃反應1h

        -

        -

        試劑三

        200

        200

        200

        -

        -


        充分震蕩30s,靜置5min,取上清

        -

        -

        上清液

        350

        350

        350

        -

        -

        標準品

        -

        -

        -

        350

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        -

        350

        工作液

        700

        700

        700

        700

        700

        充分混勻,靜置5min,于1mL玻璃比色皿中測定540nm各管吸光值,分別記為A基質管、A對照管、A測定管、A標準管和A空白管,計算ΔA測定=A基質管-A測定管-A對照管),ΔA標準=A標準管-空白管。標準曲線、空白管和基質管只需測1-2次,每個測定管需設一個對照管。

         

        三、亞硝酸還原酶活性計算

        1. 標準曲線的繪制

        以標準溶液濃度為x軸(x,μmol/mL),標準溶液對應的ΔA標準為y軸(y,ΔA標準),建立標準曲線,得到標準方程y=kx+b,將ΔA測定帶入方程得到xμmol/mL)。

        2. 酶活計算

        1)按照蛋白濃度計算

        酶活單位定義:每mg組織蛋白每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。

        NiRU/mg prot=x×V1÷V2÷Cpr÷T=x×7÷Cpr

        2)按照樣本質量計算

        酶活單位定義:每g組織每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。

        NiRU/g 質量)=x×V1÷V2×V÷W÷T=x×7÷W

        3)按照細菌/細胞數(shù)量計算

        酶活單位定義:每104個細菌/細胞每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。

        NiRU/104 質量)=x×V1÷V2×V÷細菌/細胞數(shù)量÷T=x×7÷細菌/細胞數(shù)量

        V1:取上清液前的反應體系體積,0.7mL;V2:加入的樣本體積,0.1mLV提:加入的提取液體積,1.0mL;T:反應時間,1h;W:土樣質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;細菌/細胞數(shù)量:以104計。

        實驗實例:

        1、 0.1g鳶尾葉片加入1mL提取液進行勻漿研磨,按照測定步驟操作,用微量玻璃比色皿測得計算ΔA測定= A基質管-A測定管-A對照管)=0.678-0.322-0.007=0.363,帶入標準曲線y=8.633x+0.0038,計算x=0.0416,按樣本質量計算含量得,按樣本質量計算酶活得:

        NiRU/g 質量)=x×7÷W=0.0416×7÷0.1=2.913 U/g 質量。

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