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        • 亞硝酸還原酶(NiR)檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        亞硝酸還原酶(NiR)檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-09
        亞硝酸還原酶(NiR)檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        NiR Assay Kit
        別名
        亞硝酸還原酶試劑盒 NiR Kit 亞硝酸還原酶(NiR)試劑盒 亞硝酸還原酶(NiR)測試盒
        檢測方法
        微量法微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC1540
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途亞硝酸還原酶(NiR)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        亞硝酸還原酶(NiR)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號:BC1545

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體3mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體10mL×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體10mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:每瓶臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解,2-8℃保存2周;

        2、 試劑三:臨用前加入5mL蒸餾水,可70-80℃加熱溶解;2-8℃可以保存3個月;

        3、 試劑五:若出現(xiàn)沉淀,可70-80℃加熱溶解;

        4、 標(biāo)準(zhǔn)品:10µmol/mL亞硝*標(biāo)準(zhǔn)溶液

        5、 工作液:臨用前根據(jù)樣本量將試劑四和試劑五按1:1的比例混合,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        亞硝酸還原酶(Nitrite reductase,NiR)是亞硝態(tài)氮還原過程中的關(guān)鍵酶,在自然界氮素循環(huán)過程中發(fā)揮著重要作用,其廣泛存在于微生物及植物體內(nèi),能夠催化亞硝酸鹽還原,減少亞硝態(tài)氮在環(huán)境中的積累,降低其對生物體生長發(fā)育的毒害作用。

        亞硝酸還原酶可將NO2-還原為NO,使樣本中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2-減少,即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)樣本中亞硝酸還原酶的活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織:按樣本質(zhì)量(g: 提取液體積(mL1 : 5~10比例(建議稱取0.1g樣本,加入1.0mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后,于4 ℃10000g,離心10min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

         

        2. 細(xì)菌或細(xì)胞:按細(xì)胞數(shù)量(104):提取液體積(mL500~1000 : 1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1.0mL提取液)加入提取液,冰浴超聲破碎細(xì)胞(功率200w,超聲3s,間隔7s,總時間3min),然后于4℃,10000g,離心10min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋:10µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水稀釋至0.20.1、0.050.025、0.0125、0.00625、0.003125 µmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。

        3、 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表:

        序號

        稀釋前濃度(µmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(µmol/mL

        1

        10

        20

        180

        1

        2

        1

        100

        400

        0.2

        3

        0.2

        200

        200

        0.1

        4

        0.1

        200

        200

        0.05

        5

        0.05

        200

        200

        0.025

        6

        0.025

        200

        200

        0.0125

        7

        0.0125

        200

        200

        0.00625

        8

        0.00625

        200

        200

        0.003125

        備注:下述實(shí)驗(yàn)中每個標(biāo)準(zhǔn)管需70µL標(biāo)準(zhǔn)液(注意不要在此步驟直接檢測吸光值)。

        4、 樣本測定:

        試劑名稱(μL

        基質(zhì)管

        對照管

        測定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        -

        20

        20

        -

        -

        蒸餾水

        20

        40

        -

        -

        -

        試劑一

        40

        -

        40

        -

        -

        試劑二

        40

        40

        40

        -

        -


        混勻后,25℃反應(yīng)1h

        -

        -

        試劑三

        40

        40

        40

        -

        -


        充分震蕩30s,常溫靜置5min,取上清

        -

        -

        上清液

        70

        70

        70

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        -

        70

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        -

        70

        工作液

        140

        140

        140

        140

        140

        充分混勻,常溫靜置5min,于微量玻璃比色皿或96孔板中測定540nm各管吸光值,分別記為A基質(zhì)管、A對照管、A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A空白管,計(jì)算ΔA測定=A基質(zhì)管-A測定管-A對照管),ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-空白管。空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和基質(zhì)管只需測1-2次,每個測定管需設(shè)一個對照管。

         

        三、亞硝酸還原酶活性計(jì)算

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸(x,μmol/mL),標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸(y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b,將ΔA測定帶入方程得到xμmol/mL)。

        2. 酶活計(jì)算

        1)按照蛋白濃度計(jì)算

        酶活單位定義:每mg組織蛋白每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。

        NiRU/mg prot=x×V1÷V2×V÷Cpr×V提)÷T=x×7÷Cpr

        2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活單位定義:每g組織每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。

        NiRU/g 質(zhì)量)=x×V1÷V2×V÷W÷T=x×7÷W

        3)按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活單位定義:每104個細(xì)菌/細(xì)胞每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。

        NiRU/104 cell=x×V1÷V2×V÷細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量÷T=x×7÷細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量

        V1:取上清液前的反應(yīng)體系體積,0.14mL;V2:加入的樣本體積,0.02mL;V提:加入的提取液體積,1.0mLT:反應(yīng)時間,1h;W:土樣質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量:以104計(jì)。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g楊樹葉片加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,按照測定步驟操作,用96孔板測得計(jì)算ΔA測定= A基質(zhì)管-A測定管-A對照管)=0.863-0.705-0.065=0.223,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=8.4313x+0.003,R2=0.9999,計(jì)算x=0.0261,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        NiRU/g 質(zhì)量)=x×7÷W=0.0261×7÷0.1=1.827 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0080/BC0085  硝酸還原酶NR活性檢測試劑盒

        BC1480/BC1485  水土中亞硝酸鹽含量檢測試劑盒

        BC1490/BC1495  食品中亞硝酸鹽含量檢測試劑盒

        BC1500/BC1505  植物硝態(tài)氮含量檢測試劑盒

        BC1520/BC1525  植物氨態(tài)氮含量檢測試劑盒

        BC4960/BC4965  硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒(Griess顯色法)

        亞硝酸還原酶(NiR)檢測試劑盒 微量法 亞硝酸還原酶(NiR)檢測試劑盒 微量法

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