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        • 單胺氧化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        單胺氧化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-09
        單胺氧化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱
        Monoamine Oxidase(MAO)Activity Assay Kit
        別名
        單胺氧化酶試劑盒 單胺氧化酶測(cè)試盒
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC0015
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途單胺氧化酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        單胺氧化酶(MAO)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。

        貨號(hào):BC0015

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體110 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體110 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體45mL×3

        2-8℃保存

        試劑二

        液體3 mL×1

        2-8℃保存

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        MAOEC1.4.3.4)包括MAO-AMAO-B,是一種結(jié)合在線粒體外膜上的黃素蛋白,可催化神經(jīng)遞質(zhì)和生物胺氧化脫氨。單胺氧化酶與機(jī)體老化有關(guān),被認(rèn)為是衰老的標(biāo)志,其主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官,特別是分泌腺、腦、肝臟,在無(wú)脊椎動(dòng)物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝,含量較低,具有重要的生理功能。

        MAO催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛,進(jìn)一步氧化成酸,底物在360nm處有特征吸收峰,通過測(cè)定360nm處光吸收下降的速率,可計(jì)算MAO活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96UV板、震蕩儀、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、 臨用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量取出部分提取液一、提取液二和試劑一置于4℃預(yù)冷30min

        2、 組織樣本:按照樣本質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿;1000g 4℃離心10min,取上清,將上清液轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的離心管,于10000g4℃離心30min。棄上清,沉淀中加入1mL預(yù)冷的提取液二,振蕩混勻,于16000g,4℃離心40min,棄上清,加入1mL試劑一,振蕩混勻,置冰上待測(cè)。

        3、 細(xì)菌或細(xì)胞樣本:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液一)加入提取液一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔7s,總時(shí)間3min),1000g,4℃離心10min,取上清,將上清液轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的離心管,于10000g,4℃離心30min。棄上清,沉淀中加入1mL預(yù)冷的提取液二,振蕩混勻,于16000g,4℃離心40min,棄上清,沉淀中加入1mL試劑一,振蕩混勻,置冰上待測(cè)。

        4、 血清(漿)或液體樣本:直接檢測(cè)。若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測(cè)定。

        二、測(cè)定步驟

        1、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至360nm,分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

        2、加樣表(在微量石英比色皿/96UV板中依次加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測(cè)定管

        空白管

        樣本(μL

        20

        -

        試劑一(μL

        160

        180

        試劑二(μL

        20

        20

        將上述試劑分別加入微量石英比色皿/96UV板中,迅速吹打混勻,分別測(cè)定360nm處 第10s的吸光值,記為A測(cè)定管1、A空白管1;然后置于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)2h,測(cè)定360nm處吸光值,記為A測(cè)定管2、A空白管2,計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管1-A測(cè)定管2,ΔA空白= A空白管1-A空白管2ΔA=ΔA測(cè)定-ΔA空白。空白管只需測(cè)1-2。

        三、MAO活力的計(jì)算

        a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下:

        1、按樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

        酶活定義:37℃,pH7.6條件下,每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol底物的酶量定義為一個(gè)酶活單位。

        MAO活性(U/mg prot= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V×Cpr)÷T=57.08×ΔA÷Cpr

        2、按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:37℃,pH7.6條件下,每mg組織每分鐘消耗1nmol底物定義的酶量為一個(gè)酶活單位。

        MAO活性(U /g 質(zhì)量)= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V÷V樣總×W)÷T=57.08×ΔA÷W

        3、按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:37℃,pH7.6條件下,每104細(xì)菌/細(xì)胞每分鐘消耗1nmol底物的酶量定義為一個(gè)酶活單位。

        MAO活性(U /104 cell= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T=57.08×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

        4、 按照樣本體積計(jì)算

        酶活定義:37℃,pH7.6條件下,每mL血清或液體樣本每分鐘消耗1nmol 底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

        MAO 活性(U /mL=ΔA÷?÷d ×V反總×109÷V÷T= 57.08×ΔA

        ε:底物摩爾消光系數(shù):1460L/mol/cmd:比色皿光徑,1cmV反總:反應(yīng)總體積,0.0002LV樣:加入樣本體積,0.02mL,V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間,120min;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。

        b.用96UV板測(cè)定的計(jì)算公式如下:

        1、按樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

        酶活定義:37℃,pH7.6條件下,每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol底物的酶量定義為一個(gè)酶活單位。

        MAO活性U /mg prot= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V×Cpr)÷T= 95.13×ΔA÷Cpr

        2、按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:37℃pH7.6條件下,每g組織每分鐘消耗1nmol底物的酶量定義為一個(gè)酶活單位。

        MAO活性U /g 質(zhì)量)= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V÷V樣總×W)÷T= 95.13×ΔA÷W

        3、按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:37℃,pH7.6條件下,每104細(xì)菌/細(xì)胞每分鐘消耗1nmol底物的酶量定義為一個(gè)酶活單位。

        MAO活性U /104 cell= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T= 95.13×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

        4、 按照樣本體積計(jì)算

        酶活定義:37℃,pH7.6條件下,每mL血清或液體樣本每分鐘消耗1nmol 底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

        MAO 活性(U/mL=ΔA÷?÷d ×V反總×109÷V÷T = 95.13×ΔA

        ε:底物摩爾消光系數(shù):1460L/mol/cm;d96UV光徑,0.6cmV反總:反應(yīng)總體積,0.0002LV樣:加入樣本體積,0.02mL,V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間,120min;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Bolea I, Gella A, Unzeta M. Propargylamine-derived multitarget-directed ligands: fighting Alzheimer's disease with monoamine oxidase inhibitors[J]. J Neural Transm. 2013, 120(6):893-902.

        [2] Schmidt K, Li Z, Schubert B, et al. Screening of entomopathogenic Deuteromycetes for activities on targets involved in degenerative diseases of the central nervous system[J]. Journal of Ethnopharmacology. 2003, 89(2-3):251-260.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC1090/BC1095 黃*呤氧化酶(XOD)活性檢測(cè)試劑盒

        BC1280/BC1285 二胺氧化酶(DAO)活性檢測(cè)試劑盒

        單胺氧化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 單胺氧化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

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