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        • NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測試盒 微量
        產(chǎn)品名稱:

        NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測試盒 微量

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-09
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        NADPH-cytochrome C Reductase(NCR)Activity Assay Kit
        別名
        NADPH-細(xì)*色素C還原酶試劑盒 NCR Kit NADPH-細(xì)*色素C還原酶(NCR)試劑盒 NADPH-細(xì)*色素C還原酶(NCR)測試盒
        NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測試盒 微量

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2725
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測試應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        NADPH-細(xì)*色素C還原酶(NCR)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號BC2725

        規(guī)格100T/96S

        產(chǎn)品內(nèi)容使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        粉劑×2

        4℃保存

        試劑二

        液體80mL×1

        4℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四

        粉劑×2

        4℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:臨用前取一瓶加入100mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑4℃保存可保存4

        2、 試劑三:臨用前取一支加入520μL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存2,避免反復(fù)凍融。

        3、 試劑四:臨用前取一支加入550μL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存4,避免反復(fù)凍融。

        產(chǎn)品說明

        細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。NCR作為P450酶系的重要一員,催化氧化型P450還原再生。

        NCR催化NADPH還原氧化型細(xì)*色素C,還原型細(xì)*色素C550nm處有特征吸收峰;通過測定550nm吸光度的增加速率,來計算NCR活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、超速離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。

        操作步驟

        一、粗酶液提取(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、除去細(xì)胞核和線粒體等:稱約0.5g組織,加入4℃預(yù)冷的1mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g4℃離心30min,取上清液,轉(zhuǎn)移到超速離心管中。

        2、粗制微粒體4℃,100 000g,離心60min,棄上清液。

        3、除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟2的沉淀中加1mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。

        4、最終微粒體:向步驟3的沉淀中加0.5mL試劑二,蓋緊后充分震蕩溶解,即粗酶液,置于冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至550nm,分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

        2、 臨用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量取出部分試劑二37℃水浴中預(yù)熱30min。

         

        3、空白管:取微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入10μL蒸餾水180μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四,迅速混勻后于550nm處測定2min內(nèi)吸光值變化,測定第10s和第130s吸光值,分別記為A1、A2。計算ΔA空白=A2-A1空白管只需做1-2次。

        4、測定管:取微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入10μL粗酶液、180μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四,迅速混勻后于550nm處測定2min內(nèi)吸光值變化,測定第10s和第130s吸光值,分別記為A3、A4。ΔA測定=A4-A3。

        三、NCR活性計算

        a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

        1)按蛋白濃度計算

        活性單位定義:37℃條件下,每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol還原型細(xì)*色素C1個酶活單位。

        NCR ((nmol/min /mg prot)= (ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總÷Cpr×V樣)÷T

        = 550×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr

        2)按樣本質(zhì)量計算

        活性單位定義:37℃條件下,每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol還原型細(xì)*色素C1個酶活單位。

        NCR ((nmol/min/g 質(zhì)量)= (ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總÷(V÷V樣總×W)÷T

        =275×(ΔA測定-ΔA空白)÷W

        ε:還原型細(xì)*色素C摩爾消光系數(shù),19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm;d:比色皿光徑,1cmV反總:反應(yīng)體系總體積,210μL=2.1×10-4LCpr粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定;V樣:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積,10μL=0.01mL;V樣總:樣本處理中最后加入試劑二體積,0.5mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,2min。

        b.使用96孔板測定的計算公式如下

        將上述計算公式中比色皿光徑d=1cm改為d=0.6cm進(jìn)行計算即可。

        注意事項(xiàng)

        1、如果測定吸光值A1.5ΔA1,建議稀釋樣本后再測定,計算公式中乘以稀釋倍數(shù)

        2、如果測定吸光值較低或接近空白OD值,建議增加樣本量后再進(jìn)行測定,注意同步修改計算公式。

         

        NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測試盒 微量 NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測試盒 微量

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