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        • 苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-09
        苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒
        有效期
        6個(gè)月
        儲存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        Aniline-4 hydroxylase(AH) Activity Assay Kit
        別名
        苯胺-4羥化酶試劑盒 AH Kit 苯胺-4羥化酶(AH)試劑盒 苯胺-4羥化酶(AH)測試盒
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100管/48樣

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2745
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        苯胺-4-羥化酶(AH)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號BC2745

        規(guī)格100T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑二

        液體30mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體11mL×1

        2-8℃保存

        試劑六

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑七

        液體12mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:臨用前取一瓶加入60mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑2-8℃可保存4周;

        2、 試劑三:臨用前取一瓶加入6mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;

        3、 試劑四:臨用前加入3mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑2-8℃可保存4周;

        4、 試劑六:臨用前取一瓶加入6mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑2-8℃密封可保存4周。

        5、 標(biāo)準(zhǔn)品:10nmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液

        產(chǎn)品說明

        細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。AHP450酶系中相當(dāng)于CYP2E1亞型,CYP2E1不僅參與了藥物的代謝,而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過程。

        AH催化苯胺羥化后產(chǎn)生的4-氨基酚,進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)榉?/span>-吲哚復(fù)合物,在630nm處有特征吸收峰;通過測定630nm吸光度增加速率,來計(jì)算AH活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、超速離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。

        操作步驟

        一、 粗酶液提取(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、除去細(xì)胞核和線粒體等:稱約0.5g組織,加入4℃預(yù)冷的1mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g,4℃離心30min,取上清液,轉(zhuǎn)移到超速離心管中。

        2、粗制微粒體4℃,100 000g,離心60min,棄上清液。

        3、除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟2的沉淀中加1mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。

        4、最終微粒體:向步驟3的沉淀中加0.5mL試劑二,蓋緊后充分震蕩溶解,即粗酶液,置于冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至630nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 試劑五置于冰浴冷卻30min。

        3、 EP管加入下列試劑:

        試劑名稱(μL

        對照管

        測定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        粗酶液

        50

        50

        -

        -

        試劑三

        100

        100

        -

        -

        試劑四

        -

        50

        -

        -

        蒸餾水

        50

        -

        -

        -

        渦旋混勻,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋中準(zhǔn)確水浴30min

        -


        試劑五

        100

        100

        -

        -

        渦旋混勻,置于冰浴中5min11000rpm,4℃離心10min;取上清液待測;

        -


        上清液

        100

        100

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        100

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        100

        試劑六

        100

        100

        100

        100

        試劑七

        100

        100

        100

        100

        渦旋混勻,室溫靜置30min;取出200μL至微量玻璃比色皿/96孔板中,測定630nm下吸光度,分別記為A對照管、A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管;標(biāo)準(zhǔn)管只需測1-2次。每個(gè)測定管都需設(shè)一個(gè)對照管。

        三、AH活性計(jì)算

        1)按蛋白濃度計(jì)算

        活性單位定義:37℃條件下,每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 4-氨基酚1個(gè)酶活單位。

        AH活性(U/mg prot) = C標(biāo)× V上總×A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr×V樣)÷T

        = 2×A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr

        2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

        活性單位定義:37℃條件下,每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 4-氨基酚1個(gè)酶活單位。

        AH活性(U /g 質(zhì)量) = C標(biāo)×V上總×A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(V×W÷V試劑二)÷T

        =A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W

        C標(biāo):10nmol/mL;V上總:反應(yīng)體系中上清總體積,0.3mLCpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定V樣:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.05mLW:樣本質(zhì)量,g;V試劑二:提取中加入的試劑二體積,0.5mL;T:催化反應(yīng)時(shí)間,30min

         

        注意事項(xiàng)

        1、如果測定吸光值A1.5ΔA1,建議稀釋樣本后再測定,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        2、如果測定吸光值較低或接近空白OD值,建議增加樣本量后再進(jìn)行測定,注意同步修改計(jì)算公式。

        3、粗酶液提取后需在當(dāng)日完成測定。

         

         苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒 苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒


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