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        • 磷脂酶D(PLD)檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        磷脂酶D(PLD)檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-09
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        Phospholipase D(PLD)Activity Assay Kit
        別名
        磷脂酶D試劑盒 PLD Kit 磷脂酶D(PLD)試劑盒 磷脂酶D(PLD)測(cè)試盒
        磷脂酶D(PLD)檢測(cè)試劑盒 微量法
        規(guī)格
        100T/96S
        自備試劑
        該試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC2415
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途磷脂酶D(PLD)檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        磷脂酶DPLD)活性檢測(cè)試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號(hào):BC2415

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體110mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體0.6mL×2

        -20℃保存

        試劑一

        液體120mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體5mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑四

        液體20mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1.提取液二:試劑易揮發(fā),用完后快速擰蓋,封口纏口;

        2.試劑三:試劑放于試劑瓶?jī)?nèi)玻璃管中臨用前取一支加入1.26 mL乙醇充分溶解后取上清使用;2-8℃可以分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;

        3.標(biāo)準(zhǔn)品:50umol/mL 膽*溶液,臨用前用試劑一稀釋100倍即500nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用(可以取10μL50umol/mL 膽*溶液加入990μL試劑一混勻即500nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液 )。

        產(chǎn)品說明:

        磷脂酶DPhospholipases DPLD)催化水解磷脂酰膽*末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和膽*,膽*在膽*氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫,過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基安*比林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì),在500nm處有特征吸收峰。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、超速冷凍離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、天平、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水、無水乙醇和冰。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        1、 組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例加入提取液,建議稱取約0.1g樣本,加入0.99mL提取液一和0.01mL提取液二,冰浴勻漿后于4℃,10 000g離心5min;取全部上清于4℃100 000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

        2、 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入0.99mL提取液一和0.01mL提取液二),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后于4℃,10 000g離心5min;取全部上清于4℃、100 000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

        3、 血清(漿):直接測(cè)定。

        二、測(cè)定步驟

        1、 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到500nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2、 樣本測(cè)定:

        試劑名稱 (μL)

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        測(cè)定管

        試劑一

        20

        -

        -

        試劑二

        30

        30

        30

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        20

        -

         

        -

        -

        20

        試劑三

        20

        20

        20

        充分混勻,30℃反應(yīng)30min,沸水浴5min,打開蓋子,自然冷卻2min。

        試劑四

        140

        140

        140

        30℃反應(yīng)30min,測(cè)定500nm處吸光值,分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A測(cè)定管。計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=
        A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管,ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A空白管??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。

        三、酶活計(jì)算

        1、 按蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:每毫克蛋白每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個(gè)酶活力單位。

        PLD活性 (U/mg prot) =ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷(Cpr×V提取)÷T = 16.7×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

        2、 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:每克組織每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個(gè)酶活力單位

        PLD活性 (U/g 鮮重) = ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷W÷T = 16.7×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

        3、 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個(gè)酶活力單位。

        PLD活性(U/104 cell= ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷細(xì)胞數(shù)量÷T = 16.7×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量

        4、 按血清(漿)計(jì)算:

        酶活定義:每毫升血清每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個(gè)酶活力單位。

        PLD活性(U/mL= ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V血清(漿)÷V血清(漿)÷T = 16.7×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

        C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)液濃度,500nmol/mLV提?。杭尤氲奶崛∫后w積(提取液一+提取液二),1mL;V血清(漿):血(漿)體積,0.02mL;W:樣本質(zhì)量,g;細(xì)胞數(shù)量:以萬(wàn)計(jì);Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mLT:反應(yīng)時(shí)間,30min。

        注意事項(xiàng):

        1. 顯色完成后,若有沉淀,于8000g,25℃離心5min后取上清測(cè)定。

        2. 吸光值不宜超過1,否則用試劑一將酶液進(jìn)行稀釋,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC2420/BC2425   磷脂酶CPLC)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2430/BC2435   磷脂酶A2PLA2)活性檢測(cè)試劑盒

         

        磷脂酶D(PLD)檢測(cè)試劑盒 微量法 磷脂酶D(PLD)檢測(cè)試劑盒 微量法

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