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        • 谷*酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒
        產(chǎn)品名稱(chēng):

        谷*酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-09
        谷*酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒
        單位

        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        有效期
        6個(gè)月
        英文名稱(chēng)
        Glutamate(Glu)Content Assay Kit (WST colorimetry)
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5215
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途谷*酸(Glu)含量檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        谷*酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)(WST法)

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

        貨號(hào):BC5215

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱(chēng)

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體85mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體1.5 mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑五

        液體4mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)液

        液體0.5 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑三:臨用前取1瓶加入6mL試劑一,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        2、 試劑四:臨用前取1支加入0.5 mL試劑二,用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;

        3、 標(biāo)準(zhǔn)液:10 μmol/mL谷*酸標(biāo)準(zhǔn)品。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        Glu廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,不僅是組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸之一,而且通過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成,是生物體內(nèi)主要氨基來(lái)源之一。此外,Glu還是味精的主要有效成分,常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。

        谷*酸脫氫酶(GDH)催化谷*酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADHNH4+,在1-mPMS作用下,WST-1可與NADH 反應(yīng),產(chǎn)生水溶性formazan,計(jì)算谷*含量。

         

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/超聲破碎儀、冰、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        細(xì)菌、細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200w,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),10000g,常溫離心10min,取上清待測(cè)。

        組織:稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一,進(jìn)行冰浴勻漿,10000g,常溫離心10min,取上清待測(cè)。

        液體:直接測(cè)定。(若有渾濁則離心后取上清測(cè)定)

        二、測(cè)定步驟

        1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水分別稀釋為0.625,0.3125,0.15625,0.07813,0.0390.0195、0.01、0.005、0.0025μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        3. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表:

        序號(hào)

        稀釋前濃度(µmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(µmol/mL

        1

        10

        50

        750

        0.625

        2

        0.625

        200

        200

        0.3125

        3

        0.3125

        200

        200

        0.15625

        4

        0.15625

        200

        200

        0.07813

        5

        0.07813

        200

        200

        0.039

        6

        0.039

        200

        200

        0.0195

        7

        0.0195

        200

        200

        0.01

        8

        0.01

        200

        200

        0.005

        9

        0.005

        200

        200

        0.0025

        實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需40µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        4. 操作表:

        試劑(μL

        測(cè)定管A2

        對(duì)照管A1

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        40

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        40

        樣品

        40

        40

        -

        -

        試劑一

        -

        170

        -

        170

        試劑三

        160

        -

        160

        -

        試劑四

        10

        -

        10

        -

        試劑五

        30

        30

        30

        30

        混勻,37℃避光反應(yīng)30min200μL至微量比色皿/96孔板中,在450nm下讀取對(duì)照管吸光值A1、測(cè)定管A2計(jì)算ΔA=A2-A1。ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A白管。(標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做1-2次),每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)定一個(gè)對(duì)照管。

        三、谷*酸含量計(jì)算

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,µmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(yΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,ΔA代入方程得到xµmol/mL)。

        2. 谷*酸含量計(jì)算:

        1)按照蛋白濃度計(jì)算:

        谷*酸含量(µmol/mg prot=x×V樣本÷Cpr×V樣本)=x÷Cpr

         

        2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算:

        谷*酸含量(µmol/g 質(zhì)量=x×V樣本÷W÷V樣總×V樣本)=x÷W

        3)按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

        谷*酸含量(μmol/104 cell=x×V樣本÷500÷V樣總×V樣本)=0.002x

        4)按照液體體積計(jì)算:

        谷*含量(μmol/mL=x×V樣本÷V樣本=x

        V樣總:加入提取液體積,1mL;V樣本:加入的樣本體積,0.04mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。

        注意事項(xiàng):

        1、如果測(cè)定吸光值超過(guò)線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例

        1、稱(chēng)取約 0.1g 鼠肺,加入 1mL試劑一,冰浴研磨,10000g,常溫離心10min取上清,待測(cè)。之后按照測(cè)定步驟操作,用 96 孔板測(cè)得計(jì)算 ΔA =A2 -A1=0.449-0.384=0.065,標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.5338x+0.0091,根據(jù)標(biāo)曲得出x=0.036,谷*酸含量得:
        *氨酸含量(µmol/g 質(zhì)量)=x×V樣本÷W÷V樣總×V樣本)=x÷W=0.36µmol/g。

        2、吸取0.04 mL羊血清,按照測(cè)定步驟操作,用 96 孔板測(cè)得計(jì)算ΔA =A2-A1=0.379-0.105=0.274,標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.5338x+0.0091,根據(jù)標(biāo)曲得出x=0.173,谷*酸含量得:
        谷*酸含量(μmol/mL=x×V樣本÷V樣本=x=0.173μmol/mL。

        相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):

        [1] Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019;162:364-373.(IF3.712)

        參考文獻(xiàn):

        [1] Beck R, Malthe-S?renssen D, Andreassen J P. Polycrystalline growth in precipitation of an aromatic amine derivative and l-glutamic acid[J]. Journal of crystal growth, 2009, 311(2): 320-326.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0290/BC0295  脯*酸(Pro)含量檢測(cè)試劑盒

        BC0180/BC0185  半胱*酸(Cys)含量檢測(cè)試劑盒

        谷*酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒 谷*酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒

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