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        • 錳過(guò)氧化物酶(Mnp)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        錳過(guò)氧化物酶(Mnp)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-09
        錳過(guò)氧化物酶(Mnp)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱
        Lignin peroxidase (Lip) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC1625
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途錳過(guò)氧化物酶(Mnp)活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        錳過(guò)氧化物酶(Mnp)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

        貨號(hào):BC1625

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體120mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體3mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體5mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體200μL×1

        2-8℃保存

        溶液配制:

        試劑四:臨用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需量按照試劑四(μL):蒸餾水(μL=1:49的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        錳過(guò)氧化物酶(Mnp)(EC1.11.1.13)是一種普遍存在于細(xì)菌和真菌中的微生物木質(zhì)素分解酶,在微生物木質(zhì)素分解系統(tǒng)中起著關(guān)鍵作用,它可以有效的降解木質(zhì)素以及廢水和土壤中比較難降解的化合物,在生物制漿、生物漂白和污染物的生物降解等工業(yè)領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。

        錳過(guò)氧化物酶在Mn2+環(huán)境下,可將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚,四鄰甲氧基連酚在465nm處有吸收峰,通過(guò)檢測(cè)465nm處吸光值的變化,可測(cè)定錳過(guò)氧化物酶的活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、超聲波細(xì)胞破碎儀、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、微量玻璃比色皿/96孔板、震蕩儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、 組織:按照樣本質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿;10000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。

        2、 細(xì)菌或細(xì)胞樣本:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為 500-1000:1 的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一)加入試劑一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率30%300W,超聲 3s,間隔 7s,總時(shí)間3min),10000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。

        3、液體樣本:直接檢測(cè)。若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測(cè)定。

        二、測(cè)定步驟

        1、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至465nm,可見(jiàn)分光光度計(jì)需用蒸餾水調(diào)零。

         

        2、測(cè)定前根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量取出部分試劑一、試劑二、試劑三和試劑四置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他動(dòng)物)預(yù)熱10min以上。

        3、加樣表(在微量玻璃比色皿/96孔板中依次加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測(cè)定管

        樣本(μL

        20

        試劑一(μL

        100

        試劑二(μL

        20

        試劑三(μL

        40

        試劑四(μL

        20

            將上述試劑分別加入微量玻璃比色皿/96孔板后迅速吹打混勻,記錄第30s的吸光值A1以及10min30s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA =A2-A1。若一次性測(cè)定樣本過(guò)多,可根據(jù)使用量將試劑一、二、三、四按5:1:2:1比例配成工作液后進(jìn)行預(yù)熱,測(cè)定時(shí)按照20μL樣本+180μL工作液加入微量玻璃比色皿/96孔板進(jìn)行測(cè)定。

        三、Mnp活力的計(jì)算

        A.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下:

        1.按樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

        酶活定義:pH4.5條件下,每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

        Mnp活性(U/mg prot= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V×Cpr)÷T= 82.64×ΔA÷Cpr

        2.按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:pH4.5條件下,每mg組織每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

        Mnp活性(U/g 質(zhì)量)= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×W)÷T= 82.64×ΔA÷W

        3.按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:pH4.5條件下,每104細(xì)菌/細(xì)胞每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

        Mnp活性(U/104 cell= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T= 82.64×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

        4.按照樣本體積計(jì)算

        酶活定義:pH4.5條件下,每mL血清或液體樣本每分鐘消耗1nmol 底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

        Mnp 活性(U/mL=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T= 82.64×ΔA

        ε:愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù):12100L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cmV反總:反應(yīng)總體積,0.0002LV樣:加入樣本體積,0.02mL,V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間,10 min109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol

        B.用96UV板測(cè)定的計(jì)算公式如下:

        1.按樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

        酶活定義:pH4.5條件下,每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

        Mnp活性(U/mg prot= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V×Cpr)÷T=137.74×ΔA÷Cpr

        2.按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:pH4.5條件下,每g組織每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

        Mnp活性(U/g 質(zhì)量)= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×W)÷T=137.74×ΔA÷W

         

        3. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:pH4.5條件下,每104細(xì)菌/細(xì)胞每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

        Mnp活性(U/104 cell= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T=137.74×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

        4.按照樣本體積計(jì)算

        酶活定義:pH4.5條件下,每mL血清或液體樣本每分鐘消耗1nmol 底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

        Mnp 活性(U/mL=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T= 137.74×ΔA

        ε:愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù):12100 L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.6cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.0002L;V樣:加入樣本體積,0.02mL,V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,10 min;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol

        注意事項(xiàng):

        當(dāng)A1大于1.5或者ΔA大于0.6(酶標(biāo)儀ΔA大于0.4)時(shí),建議將樣本用試劑一稀釋后測(cè)定;當(dāng)ΔA過(guò)小時(shí),可以適當(dāng)加大樣本量后重新進(jìn)行測(cè)注意同步修改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        0.1002g杏鮑菇加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清置冰上,之后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算A1=0.055,A2=0.064ΔA=A2-A1=0.009,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得

        Mnp 活性(U/g 質(zhì)量=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T=12.37U/g 質(zhì)量

        參考文獻(xiàn):

        [1] Chowdhary P, Shukla G, Raj G, et al. Microbial manganese peroxidase: a ligninolytic enzyme and its ample opportunities in research[J]. SN Applied Sciences, 2019, 1(1):45.

        [2] Rogalski J, Lundell T, Leonowicz A, et al. Production of laccase, lignin peroxidase and manganese-dependent peroxidase by various strains of Trametes versicolor depending on culture conditions[J]. Polish Society of Microbiologists, 1991, 40(3-4):221-234.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC1630/BC1635  漆酶活性檢測(cè)試劑盒

        BC0200/BC0205  過(guò)氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0090/BC0095  過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)試劑盒

        BC1610/BC1615  木質(zhì)素過(guò)氧化物酶(Lip)活性檢測(cè)試劑盒

         

        錳過(guò)氧化物酶(Mnp)活性檢測(cè)試劑盒 微量法 錳過(guò)氧化物酶(Mnp)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

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