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        • β-1,3葡聚糖酶活性檢測(cè) 糖代謝
        產(chǎn)品名稱:

        β-1,3葡聚糖酶活性檢測(cè) 糖代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-09
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        中文名稱
        β-1,3葡聚糖酶活性檢測(cè) 糖代謝
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        β-1,3-glucanase(β-1,3-GA) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        可見(jiàn)分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC0360
        規(guī)格50管/24樣供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途β-1,3葡聚糖酶含量測(cè)定應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
        可見(jiàn)分光光度法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
        貨號(hào)BC0360
        規(guī)格:50T/24S
        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體50 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一粉劑×22-8℃保存
        試劑二液體42 mL×1瓶2-8℃保存
        標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×12-8℃保存

        溶液的配制:
        試劑一:臨用前取1支加1.6 mL蒸餾水溶解,用不完的試劑2-8℃保存 4周;
        標(biāo)準(zhǔn)品:10 mg無(wú)水*糖。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解,配制成10 mg/mL葡萄糖溶液備用,2-8℃保存2周。
        產(chǎn)品說(shuō)明:
        β-1,3-GA( EC 3.2.1.39)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下,可誘導(dǎo)細(xì)胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA活性測(cè)定廣泛應(yīng)用于植物病理和逆境生理研究。
        β-1,3-GA水解昆布多糖,內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵,產(chǎn)生還原末端,通過(guò)測(cè)定還原糖生成速率,來(lái)計(jì)算其酶活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
        需自備的儀器和用品:
        可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。12000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

        2. 細(xì)菌或細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200w超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);12000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

        二、測(cè)定步驟

        1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備:將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至1、0.80.6、0.4、0.2mg/mL。

        3. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表

        序號(hào)稀釋前濃度(mg/mL)標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL)蒸餾水體積(µL)稀釋后濃度(mg/mL)
        1101009001
        21160400.8
        31120800.6
        41801200.4
        51401600.2

        實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        1. 樣本測(cè)定(在1.5mL EP 管中依次加入下列試劑)

        試劑名稱(μL測(cè)定管對(duì)照管標(biāo)準(zhǔn)管空白管
        樣本100100--
        標(biāo)準(zhǔn)液--100-
        蒸餾水-100100200
        試劑一100---
        充分混勻,放入37℃水浴60min。
        試劑二600600600600

        充分混勻,沸水浴5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻,540nm 處記錄各管吸光值A,ΔA=A 測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需做1-2次。
        如果吸光值大于2,可以用提取液對(duì)樣本稀釋后測(cè)定(計(jì)算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù))。
        三、β-1,3-GA活性計(jì)算
        1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:
        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管吸光度x(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)和濃度(y,mg/mL)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA帶入公式中計(jì)算出樣本中產(chǎn)生的還原糖的含量y值(mg/mL)。
        2、β-1,3-GA活性計(jì)算:

        1. 按蛋白濃度計(jì)算

        單位的定義:每mg組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
        β-1,3-GA活性 (U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)÷T=y÷Cpr

        1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        單位的定義:每g組織每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
        β-1,3-GA 活性(U/g 質(zhì)量)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)÷T=y÷W

        1. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
        β-1,3-GA 活性(U/104 cell)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)÷T=0.002×y
        V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間,60min=1h;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),萬(wàn)。

        相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):

        1. X Niu,Q Xu,W Wang,et al. The antifungal activity of a thaumatin-like protein from oyster Crassostrea gigas.

        Invertebrate Survival Journal. June 2018;(IF0.967)
        參考文獻(xiàn):

        1. Mohammadi M, Karr A L. Beta-1, 3-glucanase and chitinase activities in soybean root nodules[J]. Journal of plant physiology, 2002, 159(3): 245.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC0360/BC0365  β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測(cè)試劑盒
        BC2550/BC2555  α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性檢測(cè)試劑盒
        BC2560/BC2565  β-葡萄糖苷酶(β-GC)活性檢測(cè)試劑盒
        BC2570/BC2575  α-半乳糖苷酶(α-GAL)活性檢測(cè)試劑盒
         

        β-1,3葡聚糖酶活性檢測(cè) 糖代謝  β-1,3葡聚糖酶活性檢測(cè) 糖代謝


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