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        • 苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-09
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        Aniline-4 hydroxylase(AH) Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2740
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        苯胺-4-羥化酶(AH)活性檢測試劑盒說明書
        可見分光光度法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
        貨號BC2740
        規(guī)格50T/24S
        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        試劑一粉劑×22-8℃保存
        試劑二液體15mL×12-8℃保存
        試劑三粉劑×22-8℃保存
        試劑四粉劑×12-8℃保存
        試劑五液體30mL×12-8℃保存
        試劑六粉劑×22-8℃保存
        試劑七液體30mL×12-8℃保存
        標(biāo)準(zhǔn)品液體1mL×12-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:臨用前取一瓶加入30mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑2-8℃可保存4周;

        2. 試劑三:臨用前取一瓶加入15mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;

        3. 試劑四:臨用前加入10mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑2-8℃可保存4周;

        4. 試劑六:臨用前取一瓶加入15mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑2-8℃密封保存4周。

        5. 標(biāo)準(zhǔn)品:10nmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液

        產(chǎn)品說明
        細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。AHP450酶系中相當(dāng)于CYP2E1亞型,CYP2E1不僅參與了藥物的代謝,而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過程。
        AH催化苯胺羥化后產(chǎn)生的4-氨基酚,進一步轉(zhuǎn)變?yōu)榉?span style="font-family: Times New Roman, Times, serif">-吲哚復(fù)合物,在630nm處有特征吸收峰;通過測定630nm吸光度增加速率,來計算AH活性。
        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
        需自備的儀器和用品
        可見分光光度計、低溫離心機、超速離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
        操作步驟

        • 粗酶液提取(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))




        1、除去細(xì)胞核和線粒體等:稱約0.5g組織,加入4℃預(yù)冷的1mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g4℃離心30min,取上清液,轉(zhuǎn)移到超速離心管中。
        2、粗制微粒體:4℃,100 000g,離心60min,棄上清液。
        3、除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟2的沉淀中加1mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。
        4、最終微粒體:向步驟3的沉淀中加0.5mL試劑二,蓋緊后充分震蕩溶解,即粗酶液,置于冰上待測。
        二、測定步驟

        1. 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至630nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 試劑五置于冰浴冷卻30min。

        3. 在EP管加入下列試劑:

        試劑名稱(μL對照管測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管
        粗酶液250250--
        試劑三500500--
        試劑四-250--
        蒸餾水250---
        渦旋混勻,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋中準(zhǔn)確水浴30min;--
        試劑五500500--
        渦旋混勻,置于冰浴中5min;11000rpm,4℃離心10min;取上清液待測;--
        上清液500500--
        標(biāo)準(zhǔn)溶液--500-
        蒸餾水---500
        試劑六500500500500
        試劑七500500500500
        渦旋混勻,室溫靜置30min;取出1mL1mL玻璃比色皿中,測定630nm下吸光度,分別記為A對照管、A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管;標(biāo)準(zhǔn)管只需測1-2次。每個測定管都需設(shè)一個對照管。

        三、AH活性計算
        (1)按蛋白濃度計算
        活性單位定義:37℃條件下,每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 4-氨基酚為1個酶活單位。
        AH活性(U/mg prot) = C標(biāo)× V上總×(A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(Cpr×V樣)÷T
        = 2×(A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
        (2)按樣本質(zhì)量計算
        活性單位定義:37℃條件下,每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 4-氨基酚為1個酶活單位。
        AH活性(U /g 質(zhì)量) = C標(biāo)×V上總×(A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(V樣×W÷V試劑二)÷T
        =(A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
        C標(biāo):10nmol/mL;V上總反應(yīng)體系中上清總體積,1.5mL;Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定;V樣:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.25mL;W:樣本質(zhì)量,g;V試劑二:提取中加入的試劑二體積,0.5mL;T:催化反應(yīng)時間,30min。



        注意事項
        1、如果測定吸光值A1.2ΔA0.8,建議稀釋樣本后再測定,計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
        2、如果測定吸光值較低或接近空白OD值,建議增加樣本量后再進行測定,注意同步修改計算公式。
        3、粗酶液提取后需在當(dāng)日完成測定。  

        苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒 苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒

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