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        • 土壤幾丁質(zhì)酶檢測試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        土壤幾丁質(zhì)酶檢測試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-09
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Soil Chitinase Activity Assay Kit
        別名
        土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒 土壤幾丁質(zhì)酶測試盒
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S
        土壤幾丁質(zhì)酶檢測試劑盒

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC1935
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測定意義:幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        土壤幾丁質(zhì)酶活性檢測試劑盒說明書

                                                   微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號:BC1935

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體3mL×1瓶(自備)

        常溫保存

        試劑二

        液體20mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體25mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體3mL×1

        2-8℃保存

        試劑五A

        粉劑×3

        2-8℃保存

        試劑五B

        液體40mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:自備甲苯。

        2、 試劑三:懸濁液,使用前搖勻。

        3、 試劑四剛從低溫(2-8℃)條件取出會有晶體析出,加熱使其溶解即可。

        4、 試劑五:臨用前取1瓶加入12mL試劑五B,充分溶解,現(xiàn)配現(xiàn)用。用不完的試劑2-8可以保存4

        5、 標(biāo)準(zhǔn)液:5mg N-乙酰氨基葡萄糖。臨用前加入1mL試劑二配制成5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,即5000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,2-8可以保存4周。

        產(chǎn)品說明:

        幾丁質(zhì)來源非常豐富,是自然界中僅次于纖維素的第二大類生物高聚物,由于其分解非常緩慢而大量堆積容易造成環(huán)境嚴(yán)重污染。幾丁質(zhì)酶是影響土壤中氮礦化的一種重要的酶,其分解幾丁質(zhì)控制著氮循環(huán)的關(guān)鍵步驟。

        幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖,N-乙酰氨基葡萄糖與堿共熱產(chǎn)生的中間化合物可進一步與對二甲氨基苯甲醛反應(yīng)產(chǎn)生顯色物質(zhì),該顯色物質(zhì)在585nm處有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。


        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、可調(diào)式移液器、旋渦振蕩混勻儀、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、30-50目篩、蒸餾水與甲苯(不允許快遞)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        新鮮土樣風(fēng)干,過30-50目篩。 稱取約0.1g土樣,加入0.05mL試劑一,混勻,常溫靜置15min。靜置結(jié)束后,加入0.2mL試劑二與0.4mL試劑三,37振蕩反應(yīng)24h,8000rpm4℃離心10min(若離心后上清中仍有雜

         

        質(zhì),建議將上清再次離心,至澄清),取上清液置于冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至585nm,分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制:臨用前將5000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液用試劑二稀釋80倍至62.5 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。取25μL 5000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,加1975μL試劑二,充分混勻,配制成62.5μg/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。(實驗中每管需要100μL,為減小實驗誤差,故配制大體積。)

        3、 EP管中進行以下操作:

        試劑名稱

        對照管

        測定管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        上清液(μL

        100

        100

        -

        -

        試劑二(μL

        -

        -

        100

        -

        標(biāo)準(zhǔn)液(μL

        -

        -

        -

        100

        試劑四(μL

        20

        20

        20

        20


        混勻,常溫靜置5min

        混勻,沸水浴5min,流水冷卻至常溫

        試劑五(μL

        300

        300

        300

        300

        渦旋混勻,37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱20min,吸取200μL反應(yīng)液于微量玻璃比色皿/96孔板中測定585nm處吸光值,分別記為A對照、A測定、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。計算ΔA測定=A測定- A對照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)- A空白。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測1-2次。

        三、土壤幾丁質(zhì)酶活性計算

        酶活性定義:37℃條件下,每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。

        土壤幾丁質(zhì)酶活性(U/g 土樣)=ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo))×V反總÷W÷T=40.625×ΔA測定 ÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

        C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管的濃度,62.5μg/mL;V反總:樣本處理總體積,0.65mL;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時間,1d。

        注意事項:

        1. 反應(yīng)結(jié)束后立即進行比色。

        2. 試劑五有一定的毒性,試驗操作時做好個人防護。

        3. 當(dāng)A測定大于1時,建議將樣本上清液用試劑二稀釋后再進行測定。

        實驗實例:

        1、 0.1g土樣1按照測定步驟操作,用96孔板測得數(shù)據(jù)后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.098-0.051=0.047,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)- A空白=0.612-0.049=0.563。根據(jù)公式計算酶活得:

        土壤幾丁質(zhì)酶活性(U/g 土樣)=40.625×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W= 40.625×0.047÷0.563÷0.1=33.9 U/g 土樣。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0150/BC0155  土壤纖維素酶(S-CL)活性檢測試劑盒

        BC0280/BC0285  土壤堿性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性檢測試劑盒

        BC3100/BC3105  土壤硝酸還原酶(S-NR)活性檢測試劑盒

        土壤幾丁質(zhì)酶檢測試劑盒 土壤幾丁質(zhì)酶檢測試劑盒

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