蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC1270
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：使用前根據(jù)樣本數(shù)，每支加2mL水震蕩溶解后離心取上清使用，每支為10個(gè)樣本用量，溶液變黑后即不可再繼續(xù)使用；

2. 試劑五：自備乙酸乙酯和無(wú)水乙醇，根據(jù)測(cè)定樣本量，將乙酸乙酯和無(wú)水乙醇等體積混合。（提供1個(gè)125mL空瓶）

產(chǎn)品說(shuō)明：
蛋白質(zhì)羰基化是指氨基酸殘基側(cè)鏈中的氨基或亞氨基受到氧自由基攻擊最后轉(zhuǎn)變成醛基，并釋放NH₃⁺的過(guò)程.其在體內(nèi)的形成主要是通過(guò)金屬離子催化氧化系統(tǒng)完成。蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過(guò)程中的早期標(biāo)志，其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。
羰基與2,4-*二*腙，在370nm處有特征吸收峰。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
天平、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、低溫離心機(jī)、超聲細(xì)胞破碎儀、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水、無(wú)水乙醇和乙酸乙酯。

操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件

注意事項(xiàng)：
1. 試劑一使用之前根據(jù)要測(cè)定的樣本數(shù)現(xiàn)配，配置好后4℃保存，若變?yōu)楹谏?，則不能使用。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

取0.2g小鼠心臟加入2mL提取液充分勻漿后于4℃，5000rpm離心10min，取上清，加入0.2mL試劑一，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，取上清，按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得A_{370測(cè)定管}=1.269，A_{370對(duì)照管}=1.048，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g質(zhì)量）=（A_{370測(cè)定管}-A_{370對(duì)照管}）÷8÷W=0.1381 μmol/g質(zhì)量。
取0.2g國(guó)槐葉片加入2mL提取液充分勻漿后于4℃，5000rpm離心10min，取上清，加入0.2mL試劑一，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，取上清，按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得A_{370測(cè)定管}=0.137，A_{370對(duì)照管}=0.012，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g質(zhì)量）=（A_{370測(cè)定管}-A_{370對(duì)照管}）÷8÷W=0.0781 μmol/g質(zhì)量。
取胎牛血清樣本按照說(shuō)明步驟操作，直接測(cè)定，測(cè)得A_{370測(cè)定管}=0.578，A_{370對(duì)照管}=0.278，按液體體積計(jì)算酶活得：
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mL）=（A_{370測(cè)定管}-A_{370對(duì)照管}）÷17.6=0.0170 μmol/mL。
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