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        • 輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        • 輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱(chēng):

        輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2025-04-24
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱(chēng)
        輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱(chēng)
        CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢(xún)
        分子式詳詢(xún)純度詳詢(xún)
        分子量詳詢(xún)貨號(hào)BC0315
        規(guī)格100管/48樣供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        輔酶Ⅰ NAD(H)含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
        微量法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
        貨號(hào):BC0315
        規(guī)格:100T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱(chēng)規(guī)格保存條件
        酸性提取液液體25 mL×1瓶2-8℃保存
        堿性提取液液體25 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體5 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二液體1.5 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑三液體4mL×1瓶2-8℃保存
        試劑四液體0.7 mL×1支-20℃保存
        試劑五液體15 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑六液體20 mL×1瓶(自備)常溫保存
        NAD標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1-20℃保存
        NADH標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1-20℃保存

        溶液的配制:
        1、試劑三:需要嚴(yán)格避光;
        2、試劑六:19.2 mL乙醇和0.8 mL蒸餾水混合,備用;
        3、NAD標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入1.5 mL蒸餾水,即2 µmol/mL,將其稀釋為1.25 nmol/mLNAD標(biāo)準(zhǔn)溶液備
        用;
        4、NADH標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入1.4 mL蒸餾水,即2 µmol/mL,將其稀釋為1.25 nmol/mLNADH標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
        產(chǎn)品說(shuō)明:
        輔酶I包括還原型和氧化型兩種形式,在生物氧化中起傳遞氫的作用。氧化型輔酶I又稱(chēng)煙*胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)是脫氫酶的輔酶,它在糖酵解、糖異生、三羧酸循環(huán)和呼吸鏈中發(fā)揮著不可替代的作用。中間產(chǎn)物會(huì)將脫下的氫遞給NAD,使之成為NADH(還原型輔酶I)。而NADH則會(huì)作為氫的載體,在呼吸鏈中通過(guò)化學(xué)滲透偶聯(lián)的方式,合成ATP。NAD(H)在機(jī)體內(nèi)有重要的生理意義,與物質(zhì)代謝、能量代謝、抗細(xì)胞衰老、抗氧化以及一些疾病的發(fā)生密切相關(guān)。體內(nèi)輔酶I含量降低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷或衰亡。
        分別用酸性和堿性提取液提取樣本中NAD+和NADH,NADH通過(guò)PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測(cè)吸光值,而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。
        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
        需自備的儀器和用品:

        可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
        操作步驟: 具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
        注意事項(xiàng):
        1、操作過(guò)程應(yīng)避光。不可將試劑一、二、三混合后再加,必須分開(kāi)加。
        2、反應(yīng)過(guò)程要注意避光。
        3、當(dāng)吸光值大于1時(shí),建議稀釋后測(cè)量。
        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
         

        1. NAD+的提?。悍Q(chēng)取約0.1g肌肉按照提取和測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定-A對(duì)照=0.507-0.2=0.307,ΔA標(biāo)準(zhǔn)1=A標(biāo)準(zhǔn)1-A空白=0.612-0.144=0.468,按樣本質(zhì)量計(jì)算NAD+ 含量得:NAD+ (nmol/g 質(zhì)量)=1.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)1÷W=1.25×0.307÷0.468÷0.1=8.1998 nmol/g 質(zhì)量。

        NADH的提?。悍Q(chēng)取約0.1g肌肉按照提取和測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定-A對(duì)照=0.183-0.077=0.106,ΔA標(biāo)準(zhǔn)2=A標(biāo)準(zhǔn)2-A空白=0.399-0.143=0.256,按樣本質(zhì)量計(jì)算NADH 含量得:NADH  (nmol/g 質(zhì)量)=1.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)2÷W=1.25×0.106÷0.256÷0.1=5.1758 nmol/g 質(zhì)量。

        1. NAD+的提?。悍Q(chēng)取約0.1g柳樹(shù)葉,按照提取和測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定-A對(duì)照=0.171-0.101=0.07,ΔA標(biāo)準(zhǔn)1=A標(biāo)準(zhǔn)1-A空白=0.612-0.144=0.468,按樣本質(zhì)量計(jì)算NAD+ 含量得:NAD+ (nmol/g 質(zhì)量)=1.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)1÷W=1.25×0.07÷0.468÷0.1=1.8697 nmol/g 質(zhì)量。

        NADH的提取:稱(chēng)取約0.1g柳樹(shù)葉,按照提取和測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定-A對(duì)照=0.152-0.099=0.053,ΔA標(biāo)準(zhǔn)2=A標(biāo)準(zhǔn)2-A空白=0.399-0.143=0.256,按樣本質(zhì)量計(jì)算NADH 含量得:NADH  (nmol/g 質(zhì)量)=1.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)2÷W=1.25×0.053÷0.256÷0.1=2.5879 nmol/g 質(zhì)量。

        1. NAD+的提取:取0.1mL火雞血清,按照提取和測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定-A對(duì)照=0.120-0.071=0.049,ΔA標(biāo)準(zhǔn)1=A標(biāo)準(zhǔn)1-A空白=0.612-0.144=0.468,按液體體積計(jì)算NAD+ 含量得:NAD+含量(nmol/mL)=12.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)1=12.5×0.049÷0.468=1.3088 nmol/mL

        NADH的提?。喝?span style="font-family: Times New Roman, Times, serif;">0.1mL馬火雞血清,按照提取和測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管= A測(cè)定-A對(duì)照=0.089-0.065=0.024,ΔA標(biāo)準(zhǔn)2=A標(biāo)準(zhǔn)2-A空白=0.399-0.143=0.256,按液體體積計(jì)算NADH 含量得:NADH含量(nmol/mL=12.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)2=12.5×0.024÷0.256=1.1719 nmol/mL。
        相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):

        1. Xiaofen Fu,Pengsong Li,Lei Zhang,et al. Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data. Applied Microbiology and Biotechnology. March 2019;103(6) :2715–2729.(IF3.67)

        2. Mengqing Tao,Jia Jiang,Lin Wang,et al. α-Mangostin Alleviated Lipopolysaccharide Induced Acute Lung Injury in Rats by Suppressing NAMPT/NAD Controlled Inflammatory Reactions. Evidence-Based Complementary and

        Alternative Medicine. 2018;(IF1.984)

        1. Bin Zhang,Dongmei Shi, Xiangyu Zhang,et al. FK866 inhibits the epithelial-mesenchymal transition of hepatocarcinoma MHCC97-H cells. Oncology Letters. October 2018;(IF1.871)

        2. Yang K, Yin Q, Mao Q, et l. Metabolomics analysis reveals therapeutic effects of α-mangostin on collagen-induced arthritis in rats by down-regulating nicotinamide phosphoribosyltransferase[J]. Inflammation, 2019, 42(2): 741-753.

        參考文獻(xiàn):

        1. Ying W. NAD+/NADH and NADP+/NADPH in cellular functions and cell death: regulation and biological consequences[J]. Antioxidants & redox signaling, 2008, 10(2): 179-206.

        2. Gibon Y, Larher F. Cycling assay for nicotinamide adenine dinucleotides: NaCl precipitation and ethanol solubilization of the reduced tetrazolium[J]. Analytical biochemistry, 1997, 251(2): 153-157.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC0440/BC0445  二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性檢測(cè)試劑盒
        BC0630/BC0635  NADH氧化酶(NOX)活性檢測(cè)試劑盒
        BC1030/BC1035  NAD激酶(NADK)活性檢測(cè)試劑盒

        輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒 微量法 輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒 微量法

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